[發明專利]一種人松弛素H2前體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410511557.1
• 申請日: 2014-09-29
• 公開（公告）號: CN104447982B
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 周曉雷;張世光;鄒衛
• 申請（專利權）人: 深圳市辰瑞爾生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/64
• 分類號: C07K14/64;C12N15/16;A61K38/22;A61P9/04;A61P9/10;A61P11/00;A61P13/12
• 代理公司: 蘇州威世朋知識產權代理事務所(普通合伙)32235
• 代理人: 楊林潔

1.一種重組人松弛素H2前體，使用人工C肽將人松弛素H2的B鏈和A鏈按B-C-A順序連接，其特征在于所述的人工C肽具有SEQ ID NO 1-4任一項所示的氨基酸序列，人松弛素H2前體為如下任一條所示的序列：

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQSRQLYSALANKCCHVGCTKRSLARFC；

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQGRQLYSALANKCCHVGCTKRSL ARFC；

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQVRQLYSALANKCCHVGCTKRSLARFC；

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQARQLYSALANKCCHVGCTKRSLARFC；

其中MGHHHHHHHHHHSSGRD為前導肽S序列。

2.一種寡聚核酸序列，其編碼權利要求1所述的任一條人松弛素H2前體。

3.權利要求2所述的寡聚核酸序列，其特征在于具有SEQ ID NO 6 所示的核酸序列。

4.一種載體，其包含權利要求2或3所述的寡聚核酸序列。

5.一種宿主細胞，其包含權利要求4所述的載體或權利要求2或3所述的寡聚核酸序列。

6.權利要求1所述的重組人松弛素H2前體的制備方法，其包括培養權利要求5所述的宿主細胞和分離權利要求1所述的重組人松弛素H2前體的步驟。

7.權利要求1所述的人松弛素H2前體的制備方法，其特征在于：

1）獲得重組基因：獲得表達人松弛素H2前體的寡聚核酸序列，所述寡聚核酸序列具有權利要求2或3所示的序列；

2）獲得重組載體：將步驟1）獲得的寡聚核酸序列插入載體質粒，獲得含有重組基因的重組載體；

3）獲得基因工程菌：將步驟2）獲得的重組載體轉化宿主細胞獲得基因工程菌；

4）表達外源基因：基因工程菌發酵表達重組人松弛素H2前體蛋白；

5）收集前體蛋白：裂解菌體，收集重組人松弛素H2前體蛋白；

6）純化目的蛋白：通過蛋白酶酶切去除前導肽S、C肽，并經層析純化步驟獲得成熟的人松弛素H2蛋白。