[發(fā)明專利]一種環(huán)介導(dǎo)等溫擴增引物在制備檢測牛邊緣無漿體病原的試劑中的用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410509621.2
• 申請日: 2014-09-18
• 公開（公告）號: CN104293936A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 倪宏波;王欣;王云光;安先全;蔣慧婷
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種環(huán)介導(dǎo)等溫擴增引物在制備檢測牛邊緣無漿體病原的試劑中的用途，其特征在于，

特異性LAMP引物根據(jù)Msp5基因設(shè)計3對引物：外，內(nèi)，環(huán)引物，正向外引物命名為Msp5-F3b，反向外引物命名為Msp5-B3b，正向內(nèi)引物命名為Msp5-FIPb，反向內(nèi)引物命名為Msp5-BIPb，為了加速反應(yīng)設(shè)計環(huán)路引物，其中包括正向環(huán)引物Msp5-LFb和反向環(huán)引物Msp5-LBb，三對的外引物用于PCR檢測；

Msp5-F3b?ACCTTCTGCTGTTCGTTG

Msp5-B3b?GAGAAGCCATGCCTAACTC

Msp5-FIPb?GTTGAAAGACGCGGAGGCTAAATCGGCGA

(F1c+F2)?GAGGTTTAC

Msp5-BIPb?CCGTCAGTAGCGGCGATTTGTACTTACAGG

(B1c+B2)?CTGAGAAGC

Msp5-LFb?TGCCCTCACTTACAACTTCG

Msp5-LBb?CGGCAAGCACATGTTGGTA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增引物在制備檢測牛邊緣無漿體病原的試劑中的用途，其特征在于，采用以下步驟完成：

LAMP反應(yīng)體系是25μL，包括0.4μM外引物，1.6μM內(nèi)引物，0.8μM環(huán)引物，1μLDNA樣品，硫酸鎂1mM?dNTP?Mix?1mm，1mm甜菜堿，2.5μL10×Thermopol?bufferlU的Bst?DNA聚合酶，加ddH₂0共25μL；混勻后，加入20μL油混勻并離心；在PCR管的中下部加入0.5μL?SYBR?GREEN?I染料然后輕輕蓋上，以防止SYBR?GREEN?I染料降入管底；將混合物在63℃下恒溫反應(yīng)20分鐘；反應(yīng)后，在光亮視野下觀察到混合物與SYBR?GREEN?I染料在PCR管中的顏色變化，并在紫外線照射下365nm處也可觀察到；之后LAMP產(chǎn)物3μL用0.8％瓊脂糖凝膠電泳分析。