[發明專利]卵巢癌干細胞疫苗及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410502795.6
• 申請日: 2014-09-26
• 公開（公告）號: CN104258381A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 陳繼冰;林茂;左建生;劉建國;徐克成;牛立志
• 申請（專利權）人: 廣州復大醫療股份有限公司復大腫瘤醫院
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K39/39;C12N5/095;A61P15/08;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

技術領域

本發明涉及生物醫藥工程技術，涉及一種腫瘤干細胞疫苗及其制備和應用。

背景技術

惡性腫瘤是一種全身性的慢性疾病。在中晚期患者體內，不僅臟器中有影像學檢查時明顯的團塊腫瘤，在外周血中更有大量看不見的循環腫瘤細胞和腫瘤干細胞(Cancer?stem?cell,CSC)，隨時準備定居在機體易感部位，發育成新的轉移灶，這也是腫瘤無法根治的原因。傳統的腫瘤治療包括4種主要療法，即手術、化療、放療和免疫治療。通常前三種療法治療3-5年后，腫瘤都會發生周邊臟器或遠端臟器的轉移。隨著對CSC研究的深入，人們已經明確復發和轉移的原因不是手術做得不徹底，而是由于缺乏有效的控制、甚至消滅CSC的方法。

CSC來自人類自體干細胞的惡變，具有低分化度和高擴增性等特點。這些干細胞可抵抗幾乎全部的傳統化療藥物及放療，可在傳統治療的同時即引起腫瘤卵巢復發和轉移。這種現象對于很多免疫治療也不例外，原因是過去一直使用成熟腫瘤細胞作為抗原供免疫細胞識別，而CSC不表達這些抗原，可逃避免疫攻擊。所以，腫瘤的免疫治療急需更新觀念，將治療的主攻方向從成熟腫瘤細胞轉變為CSC。

目前國際公認的成熟的尋找CSC的方法是利用ALDEFLUOR/ALDH在人類腫瘤中尋找。ALDH是所有干細胞中共有的一種酶，在腫瘤干細胞中高或強表達，而在普通干細胞中弱或無表達。

目前，為了獲得腫瘤干細胞(CSC)，人們常通過大量培養普通的腫瘤細胞系，由單瓶消化擴增至多瓶，再提取出其內的腫瘤干細胞。采用這種方法，其存在很多弊端：獲取的腫瘤干細胞數量有限，普通腫瘤細胞培養花費的人力與財力頗大，長期大量培養各種腫瘤細胞會需要很多培養試劑、配置專人、容易污染致死，甚至出錯；腫瘤干細胞培養存活率低；培養普通腫瘤細胞因培養瓶或培養箱空間有限，獲得的細胞數量也就不多，從中再抽取腫瘤干細胞，得到的腫瘤干細胞量就更少，遠無法滿足需求。因此，開發一種操作簡單、快捷的有助于獲取高產量的腫瘤干細胞(CSC)的制備方法也是非常有必要的。

近年來，已經有關于腫瘤干細胞疫苗具有抗腫瘤療效的報道，理論上滅活的腫瘤干細胞可被直接作為疫苗，但是臨床上的療效很不理想，因此有必要研究和開發適合于臨床應用的腫瘤干細胞疫苗。

卵巢惡性腫瘤(卵巢癌)在女性常見惡性腫瘤中占2.4％～6.5％，在女性生殖系統癌瘤中占第3位，次于宮頸癌和宮體癌。但因卵巢癌致死者，卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴重威脅。卵巢癌的病因尚不清楚，其發病可能與年齡、生育、血型、精神因素及環境等有關。近幾年來，由于對宮頸癌及宮體癌的防治，取得了一定的成效，而有關卵巢癌的防治方面收效相對較小。所以在婦女生殖系統癌瘤中，卵巢癌是造成死亡原因最高的一種腫瘤。北京市8個醫院的材料中，卵巢惡性腫瘤占女性生殖系統惡性腫瘤的22.9％。卵巢惡性腫瘤中，不論是國內或國外的資料，均以上皮性癌最為多見。中國惡性生殖細胞腫瘤的發病率，據幾位作者的報道，均比國外發病率高。卵巢癌具有侵襲性和難治愈的特點,治療后仍有可能復發或轉移。而其起源、復發與轉移的真正原因可能是存在于卵巢癌內極少數具有干細胞的自我更新能力和多向分化潛能的細胞群，即卵巢癌干細胞，這些細胞具有化療、放療及缺氧抵抗性，同時具有高致瘤性、高侵襲轉移性，在卵巢癌的發生﹑發展乃至轉移﹑復發中起著極其重要作用。然而，放療和化療對存在于腫瘤中數量較少的干細胞樣細胞群療效甚微，經過治療后殘存的卵巢癌干細胞的增殖足以促使卵巢癌復發和轉移之一。目前尚缺乏有效的卵巢癌干細胞疫苗，本領域技術人員在這方面亟待取得突破。

發明內容

本發明的第一個方面是提供一種卵巢癌干細胞疫苗，對卵巢癌患者具有積極地治療效果，可增強患者的免疫功能。

本發明所述的卵巢癌干細胞疫苗包括：按體積比為3:1:1混合的滅活的卵巢癌干細胞、甘露聚糖肽和脂肪乳。

本發明的第二個方面提供一種卵巢癌干細胞疫苗的制備方法，可實現簡單、快捷地獲取高產量、易于質量控制的卵巢癌干細胞，并制備出臨床上有效的卵巢癌干細胞疫苗。

本發明所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法，包括以下步驟：獲得卵巢癌干細胞；將所述卵巢癌干細胞滅活；將滅活的卵巢癌干細胞凍融在生理鹽水里，與佐劑甘露聚糖肽、脂肪乳混勻，從而獲得所述的卵巢癌干細胞疫苗。

根據本發明所述的卵巢癌干細胞疫苗的制備方法的進一步特征，所述滅活包括：將卵巢癌干細胞由-80℃至20℃反復凍融五次致死。