[發(fā)明專利]一種用于脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410498814.2
• 申請日: 2014-09-25
• 公開（公告）號(hào): CN104258596A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓錚;郭文博;趙志輝;楊俊花;陳慧英;孫真真
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): B01D15/20
• 分類號(hào): B01D15/20;G01N1/40;G01N1/34
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31287
• 代理人: 張竹梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及一種用于脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱。

背景技術(shù)

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)，又稱嘔吐毒素，屬于單端孢霉烯族類化合物，是雪腐鐮刀菌烯醇的一種脫氧衍生物，主要由禾谷鐮刀菌(Fusarium?graminearum)在霉變的農(nóng)作物中產(chǎn)生。DON具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性、免疫毒性和胚胎毒性，對血液系統(tǒng)、中樞系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及鈣磷代謝也有嚴(yán)重的影響，并具有一定的致畸作用。此外，研究表明，DON可能是一種潛在的弱的致癌劑。多種食用農(nóng)產(chǎn)品及其加工品如小麥、大麥、玉米等在其保存、運(yùn)輸過程中非常容易遭受DON的污染，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，2011年我國最新的國家標(biāo)準(zhǔn)GB2761-2011規(guī)定玉米及其制品(玉米渣、玉米片、玉米面)、小麥、大麥、麥片、小麥粉中DON的限量為1000μg/kg。由于農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)復(fù)雜多樣，容易造成基質(zhì)干擾，所以前處理的富集凈化對于農(nóng)產(chǎn)品中DON的檢測分析至關(guān)重要；另外，DON屬于產(chǎn)毒真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，極難通過人工合成途徑獲得，獲得大量DON標(biāo)準(zhǔn)品最簡單有效得方法就是將產(chǎn)毒菌接種在大米培養(yǎng)基，獲得高含量的DON大米基質(zhì)，然后分離純化。由于基質(zhì)中含有的大量色素、鞣質(zhì)等雜質(zhì)，利用簡單吸附凈化的方法很難去除，如果直接將基質(zhì)提取液進(jìn)中壓制備色譜分離純化，將大大縮短制備柱的使用壽命，所以對DON富集凈化十分必要。本發(fā)明固相萃取凈化柱不僅能除去提取液中的色素、油脂、鞣質(zhì)等對色譜柱有嚴(yán)重?fù)p害的雜質(zhì)，還能對樣品中微量的DON毒素實(shí)驗(yàn)富集，提高了檢測分析方法的靈敏度，為農(nóng)產(chǎn)品中DON的風(fēng)險(xiǎn)評估奠定基礎(chǔ)。

傳統(tǒng)的DON凈化方法通常是使用液液萃取或者層析柱來進(jìn)行凈化，但是，此方法操作復(fù)雜，耗時(shí)耗力，且產(chǎn)生了大量的廢棄物，對環(huán)境產(chǎn)生較大破壞。固相萃取SPE(Solide?Phase?Extraction)是一種基于色譜分離的樣品前處理方法，利用吸附劑將液體樣品中的特定化合物吸附，與樣品的基質(zhì)和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫，達(dá)到分離或者富集目標(biāo)化合物的目的，從而大大提高工作效率，提高靈敏度和準(zhǔn)確度，達(dá)到既定量準(zhǔn)確又快速簡便的要求，但是由于商品化的固相萃取柱其價(jià)格昂貴，單支價(jià)格超過15元，不適合大量樣品的檢測及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備工作，極大地限制了其應(yīng)用的普遍性。目前，尚缺乏操作簡單、價(jià)格低廉的能夠用于DON富集、凈化的前處理固相柱。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明首先提供了一種用于脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱中的裝填材料，該裝填材料由硅膠、中性氧化鋁和弗羅里硅土組成；

其中硅膠、中性氧化鋁和弗羅里硅土的重量比為0.5-2：0.1-1：0.1-1。

本發(fā)明還提供一種用于脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱，其包括萃取容器、上述裝填材料以及篩板；

其中裝填材料在萃取容器內(nèi)，篩板在裝填材料上部；

萃取容器內(nèi)下部還有容器內(nèi)篩板。

所述的萃取容器可為下層帶篩板的聚丙烯固相萃取空管；

其中裝填材料中的硅膠、中性氧化鋁和弗羅里硅土可分三層疊放，也可以混合；分三層疊放時(shí)，三層沒有特定的順序要求，可以依次從上到下分別為硅膠層、中性氧化鋁層和弗羅里硅土層，也可以依次從下到上分別為硅膠層、中性氧化鋁層和弗羅里硅土層。

具體的說，本發(fā)明的一種用于脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱，其包括萃取容器、硅膠層、中性氧化鋁層、弗羅里硅土層和篩板，如圖2。

本發(fā)明利用硅膠、中性氧化鋁、弗羅里硅土研制了一種簡便、高效、經(jīng)濟(jì)的裝填材料，利用該裝填材料制備的用于脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱，可以用以除去鞣質(zhì)、色素等干擾物，提高了脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)檢測分析方法的靈敏度，可滿足農(nóng)產(chǎn)品中DON的痕量檢測分析。本發(fā)明建立的固相萃取柱具有很高的回收率(90.5±1.8％、98.4±2.1％、106.9±4.4％)和靈敏度(采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法分析后，靈敏度均低于10μg/kg)的同時(shí)，制作更加簡單、使用方便，單支固相萃取柱的成本不超過5元，且操作簡單，滿足了國內(nèi)外DON檢測及標(biāo)準(zhǔn)品制備前處理的要求。

附圖說明

圖1脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱簡略圖

圖2一種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇富集凈化的固相萃取柱

圖3a對照溶液組UPLC-PDA全掃描圖

圖3b過柱溶液組UPLC-PDA全掃描圖