[發明專利]一種野敗型不育基因PCR檢測引物及其應用

有效

• 申請號: 201410492719.1
• 申請日: 2014-09-24
• 公開（公告）號: CN104278089A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 戴偉民;張幫華;宋小玲;強勝
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 裴詠萍

1.一種野敗型不育基因PCR檢測引物，其特征在于：所述引物為WA7，包括正向引物5’-?TTTGCCTTATTTTGACCTGTTTGA-3’、反向引物5’-?TACTTTCAGGAGGGGAGGCA?-3’。

2.權利要求1所述野敗型不育基因PCR檢測引物在篩選雜交稻方面的應用。

3.一種組合引物，其特征在于：所述組合引物為WA7/RED4，包括WA7正向引物5’-?TTTGCCTTATTTTGACCTGTTTGA-3’、WA7反向引物5’-?TACTTTCAGGAGGGGAGGCA?-3’、RED4正向引物5’-?TTACAGGGGAGCAGAAACA?-3’和RED4反向引物5’-?TCTTCTCCTCTCTTTCAGCAC?-3’。

4.權利要求3所述組合引物在一次性檢測雜交稻、雜草稻和常規稻方面的應用。

5.權利要求4所述的應用，其特征在于：所述組合引物一次性檢測雜交稻、雜草稻和常規稻的步驟如下：

（1）DNA提取：提取待檢測的雜草稻、雜交稻或常規稻DNA；

（2）PCR擴增：將步驟（1）提取的DNA進行PCR擴增；所述PCR擴增采用所述組合引物；

（3）電泳：將步驟（2）中的PCR產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，染色觀察。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述步驟（2）中PCR擴增體系為：?DNA?1μL，2×PCR?Mix?5.0μL，組合引物WA7/RED4?0.25?μL，ddH₂O?3.5μL；所述DNA濃度為10?ng/μl?；所述2×PCR?Mix?成分為：dNTP?0.2?mmol?L^-1、KCl?100?mmol?L^-1、Tris-HCl?20?mmol?L^-1、Taq?Polymerase?5?U/100?μL、MgCl₂?3.0?mmol?L^-1；所述Tris-HCl的pH值為8.5。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述步驟（2）中PCR擴增程序為94℃預變性5?min，94℃變性45?s，55℃退火45?s，72℃延伸l?min，30?個循環；最后72℃延伸8?min。