[發明專利]一種使用硫酸軟骨素酶生產硫酸乙酰肝素的工藝

在審

• 申請號: 201410480890.0
• 申請日: 2014-09-19
• 公開（公告）號: CN104293866A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 楊曉宏;郭林;李榮;崔慧斐;李福川;陳少鵬;張中志
• 申請（專利權）人: 東營天東制藥有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26
• 代理公司: 東營雙橋專利代理有限責任公司 37107
• 代理人: 羅文遠

1.一種使用硫酸軟骨素酶生產硫酸乙酰肝素的工藝，其特征是包括如下制作步驟，濃度按質量百分比：

將肝素鈉粗品溶于濃度為2％的氯化鈉溶液中，采用酶解法酶解，對酶解液用陰離子交換樹脂充分吸附；

步驟A中的陰離子交換樹脂用濃度為3.0%-6.0%的氯化鈉溶液進行洗脫，得到洗脫液經乙醇沉淀烘干得到洗脫物；

步驟B中得到的洗脫物溶為10.0%濃度，調節pH值為8.0-8.5，添加洗脫物重量2.0%-3.5%的CaCl₂，后添加洗脫物重量3.0%-4.5%的Na₂CO₃充分攪拌反應，將沉淀過濾除去得到上清液；

將步驟C中的上清料液調節pH值為6.0-7.0，溫度20-40℃，加入硫酸軟骨素ABC酶量為：酶/洗脫物=1000-2000?IU/Kg，攪拌酶解8-12h；或調節上清料液pH值7.0-8.5，溫度20-40℃，加入硫酸軟骨素B酶量為：酶/洗脫物=1500-2500?IU/Kg洗脫物，攪拌酶解8-12h；

將酶解液用C步驟再次除蛋白，調pH值至7.0，用3K超濾膜進行超濾3-4h，取截留液用乙醇1.5-2.0倍沉淀；

將步驟E所得沉淀物用純化水溶解，加入乙二胺四乙酸EDTA進行攪拌、吸附、過濾，濾液用1.5-2.0倍藥用乙醇沉淀，所得的沉淀物溶解并用雙氧水氧化4h；

將步驟F所得料液加入1.5-2.0倍藥用乙醇沉淀，棄上清，所得固體沉淀物再用純化水溶成10%濃度，經0.22微米濾芯過濾，然后真空冷凍干燥，最終得到硫酸乙酰肝素精品。

2.根據權利要求1所述的使用硫酸軟骨素酶生產硫酸乙酰肝素的工藝，其特征是：所述的酶解法是指：

調節步驟A的肝素鈉溶液pH值8.0-8.5、溫度35-38℃，加入肝素鈉粗品重量的1.0%-2.0%的胰蛋白酶解3-4h，酶解完畢調料液pH值7.0-7.5，用強堿型陰離子交換樹脂對其充分吸附。