[發明專利]一種診斷試劑盒和使用該診斷試劑盒鑒別結核病與腫瘤的方法

無效

• 申請號: 201410479314.4
• 申請日: 2014-09-18
• 公開（公告）號: CN104198694A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 邵凌云;高巖;張文宏;吳晶;陳嘉臻
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/574
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

技術領域

本發明涉及生物醫療領域，尤其涉及一種IL-31診斷試劑盒和使用該IL-31診斷試劑盒鑒別結核病與腫瘤的方法。

背景技術

胸腔積液可由多種疾病引起，胸腔積液常見的原因主要包括腫瘤性胸膜轉移和結核性胸膜炎及肺部炎癥所致。胸腔積液的病因診斷對胸腔積液治療方法的選擇具有極其重要的指導意義。

良惡性胸腔積液鑒別一直是臨床上的一個難點，惡性胸腔積液與結核性胸腔腹水的鑒別尤為困難，胸腔積液細胞學檢查找到腫瘤細胞對惡性胸腔積液有確診價值，但有時腫瘤細胞與炎性間皮細胞、巨噬細胞等難以鑒別，同時還受診斷者水平和樣本采集等因素的影響，其敏感性僅40％-60％，結核性胸膜炎的診斷主要包括胸水生化檢查、結核菌素皮試(TST)、胸腔積液細菌學檢查(抗酸染色涂片和結核分枝桿菌培養)、胸膜組織病理活檢等。但上述檢查方法由于其特異性和敏感性均較低，不能滿足臨床工作需要，因此開發新的快速診斷技術非常必要。

中國專利CN102230903A公開了一種用于診斷癌性胸腔積液的小分子標記物及其應用，結合核磁共振技術和逐步判別函數分析法篩選出11個小分子標記物，尤其乳酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿和α-葡萄糖這5個小分子標記物，然而這些小分子標記物是通過篩選方法確定，可能會存在漏檢、準確率不高等問題，而且無法對結核性胸膜炎進行診斷。

結核性胸膜炎伴胸腔積液是臨床上最常見的肺外結核，結核分枝桿菌對胸膜的侵犯與遲發型變態反應是結核性胸膜炎發病機制中的兩個重要環節。炎癥過程使胸膜血管通透性增加，富含蛋白質和特異的淋巴細胞的液體聚集在胸膜腔中，在這一過程中多種T細胞亞群參與了結核性胸膜炎的免疫應答反應，包括Th1、Th2、Th9、Th17、Th22等，其分泌的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-22等參與結核的免疫應答反應。

白介素31(interleukin-31,IL-31)是2004年Dillon等新近發現的細胞因子。初步研究證實，IL-31及其受體通過調節免疫、調節細胞增殖等作用發揮其功能。目前研究認為，IL-31是具有4個螺旋結構的單鏈分子，主要由CD4+Th2細胞產生，在生理狀態下表達水平較低。IL-31是通過IL-31RA受體——GPL(gp130-like?receptor)與OSMR形成的異二聚體進行信號轉導的。GPL屬于I型細胞因子家族，有研究報道在髓系單核細胞、皮膚、肺與前列的上皮細胞及激活的CD4+T細胞，均有IL-31RA表達。IL-31激活同時表達IL-31RA和OSMR的細胞；IL-31與IL-31RA結合后主要通過JAK-STAT通路、MPAK通路和PI3-kinase/AKT來進行信號轉導發揮效應。IL-31受體主要分布在上皮細胞和淋巴細胞，在皮膚及支氣管等組織中表達水平較高。在小鼠模型中發現，IL-31可負向調控CD4+Th2細胞因子的分泌。近年來研究發現，IL-31參與搔癢、禿發癥、皮膚損傷、氣道超敏反應、特應性皮炎、炎癥性腸病及自身免疫相關性疾病的發病過程。但IL-31在結核性胸膜炎免疫發病機制中作用及表達情況目前國內外無相關研究。

發明內容

本發明為解決現有技術中的上述問題提出的，其目的是提供一種利用IL-31診斷試劑盒鑒別結核病與腫瘤的方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明的第一個方面是提供一種鑒別結核病與腫瘤的診斷試劑盒，該診斷試劑盒包括IL-31抗體，通過雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA法)檢測樣本中IL-31含量鑒別結核病和腫瘤。

優選地，所述樣本為胸腔積液、腹腔積液等體內積液中的任意一種或多種，更優選為胸腔積液。

優選地，所述診斷試劑盒包括IL-31捕獲抗體和檢測抗體，稀釋液、標準品、顯色液、終止液、底物、包被緩沖液、洗滌緩沖液中的一種或幾種。

優選地，所述稀釋液包括牛血清白蛋白、冷害魚皮餃、硫柳汞、磷酸緩沖液中的一種或幾種。

優選地，所述顯色液為辣根過氧化物酶。

優選地，所述終止液為稀硫酸溶液。

優選地，所述底物包括四甲基聯苯胺、磷酸棗檸檬酸、雙氧水、蒸餾水中的一種或幾種；所述包被緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽溶液中的一種或幾種；所述洗滌緩沖液包括磷酸鹽、氯化鈉、氯化鉀、吐溫-20、蒸餾水中的一種或幾種。

優選地，所述診斷試劑盒還包括固體載體、封板膜。

優選地，所述固體載體為96孔平底板。