[發明專利]一種檢測五氯酚鈉的試紙條及方法

在審

• 申請號: 201410475348.6
• 申請日: 2014-09-17
• 公開（公告）號: CN105116148A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發明（設計）人: 羅曉琴;馮才偉;崔海峰;萬宇平;齊三峰;何方洋;楊昌松;彭鴿
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種檢測五氯酚鈉的試紙條及方法，具體涉及一種用于檢測五氯酚鈉的膠體金試紙條，其特別適于豬肉、雞肉、魚、蝦等動物組織中五氯酚鈉殘留的檢測。

技術背景

五氯酚鈉(PentachlorophenoI-Na，簡寫PCP-Na)是五氯酚的鈉鹽，屬有機氯農藥，通常為白色針狀或鱗片狀結晶，易揮發，有明顯的刺鼻氣味。易溶于水，4℃時溶解度為20.8％，其水溶液有強烈的酚臭味，性質穩定，在陽光的直接照射下不易分解。五氯酚鈉作為一種高效、廉價的殺蟲劑、抗菌劑、防腐劑和除草劑，在世界范圍內被廣泛使用。20世紀50-60年代，我國曾經大量使用五氯酚鈉鹽殺滅血吸蟲的寄主釘螺，效果明顯，但五氯酚鈉性質比較穩定，對水體造成污染。同時，五氯酚鈉在動植物體內的富集率高，可通過食物鏈進入人體，嚴重危害人體健康。因此，美國環境保護署(EPA)將五氯酚鈉列為可疑致癌物質，并限制其使用。我國農業部于2002年也將五氯酚鈉列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》，禁止在水生動物養殖中使用。

GB29708-2013《食品安全國家標準動物性食品中五氯酚鈉殘留量的測定》使用氣相色譜-質譜法測定動物性食品中的五氯酚鈉殘留量，儀器方法具有靈敏度高、結果準確等優點，但是資金和人員等投入成本較高。因此，針對現有五氯酚鈉檢測技術上的不足，我們設計了一種利用膠體金免疫層析技術檢測豬肉、雞肉、魚、蝦等動物組織中五氯酚鈉的方法，該方法特異性好、靈敏度高、操作簡便、檢測成本低、適合于批量樣品的篩選檢測，是理想的快速篩選手段，能夠更好地滿足我國豬肉、雞肉、魚、蝦等動物組織企業、政府職能監管部門等開展檢測工作。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測五氯酚鈉的試紙條。

本發明所提供的試紙條包括試紙和微孔試劑，試紙包括底板、樣品吸收墊、反應膜、吸水墊、保護膜，其依次連接，反應膜上有檢測線和質控線，檢測線上包被有五氯酚鈉半抗原-載體蛋白偶聯物，質控線上包被有羊抗鼠抗抗體；微孔試劑具有微孔塞，其中凍干有五氯酚鈉單克隆抗體-膠體金標記物。

所述五氯酚鈉半抗原-載體蛋白偶聯物是由五氯酚鈉半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述五氯酚鈉半抗原是由五氯酚鈉與4溴丁酸乙酯反應得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

所述五氯酚鈉單克隆抗體-膠體金標記物中的五氯酚鈉單克隆抗體是以五氯酚鈉半抗原-載體蛋白作為免疫原制備獲得。

所述樣品吸收墊上粘貼有保護膜，為檢測端，上面有MAX標記線。

所述檢測線位于近于有MAX標記的保護膜的一端，所述質控線位于遠離有MAX標記的保護膜的一端。

所述底板可為PVC底板或其他硬質不吸水的材料；所述樣品吸收墊可為吸濾紙或濾油紙；所述吸水墊為吸水紙；所述反應膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜；所述保護膜為PE材質保護膜。

本發明的另一個目的是提供一種制備上述試紙條的方法，其包括步驟：

1)制備凍干有五氯酚鈉單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑；

2)制備具有包被五氯酚鈉半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線和包被羊抗鼠抗抗體的質控線的反應膜；

3)將2)制備好的反應膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板組裝成試紙；

4)將1)和3)制備好的凍干有五氯酚鈉單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑和試紙組裝成試紙條。

具體地說，步驟包括：

1)將五氯酚鈉與4溴丁酸乙酯反應，制備五氯酚鈉半抗原；

2)將五氯酚鈉半抗原與載體蛋白偶聯，制備五氯酚鈉半抗原-載體蛋白偶聯物；

3)用五氯酚鈉半抗原-載體蛋白偶聯物免疫小鼠，將小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞通過融合、篩選，得到分泌五氯酚鈉單克隆抗體的雜交瘤細胞株；

4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗體；

5)分別將五氯酚鈉半抗原-載體蛋白偶聯物和羊抗鼠抗抗體包被于反應膜的檢測線(T)和質控線(C)；

6)用檸檬酸三鈉與氯金酸反應制備膠體金；

7)將制備的五氯酚鈉單克隆抗體加入到制備的膠體金中，得到五氯酚鈉單克隆抗體-膠體金標記物；

8)將五氯酚鈉單克隆抗體-膠體金標記物凍干在微孔試劑中后，將微孔試劑加上微孔塞；

9)將樣品吸收墊用含0.5％牛血清白蛋白(體積百分含量)、pH為7.2、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液浸泡2h，37℃下烘干2h；

10)在底板上按順序粘貼上樣品吸收墊、反應膜、吸水墊和保護膜；