[發明專利]一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法

在審

• 申請號: 201410473759.1
• 申請日: 2014-09-17
• 公開（公告）號: CN104195202A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 劉巴寧;鄭安喬
• 申請（專利權）人: 中山安蕎生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K14/81;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
• 代理公司: 東莞市中正知識產權事務所 44231
• 代理人: 侯來旺

1.??一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，包括以下步驟：

（1）樣品預處理：取云芝3-5g冷凍干燥至恒重，粉碎過篩，取篩下樣品粉末備用；

（2）菌種培養活化：取步驟（1）中制得的樣品粉末置入斜面培養基中進行培養，得到活化的菌株；

（3）搖瓶發酵培養：取步驟（2）中活化的菌株置入發酵瓶中進行搖瓶發酵培養，得菌株發酵液；

（4）胃蛋白酶抑制劑的提取：將步驟（3）中制得的菌株發酵液進行超聲波細胞破碎，離心，經大孔樹脂脫色，取上清液透析后進行胃蛋白酶抑制劑的純化,制得胃蛋白酶抑制劑。

2.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（1）中所述的粉碎過篩為過40-80目篩。

3.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（2）中所述的斜面培養基的組分為：馬鈴薯15-25%，葡萄糖1-3%，磷酸二氫鉀0.1-0.5%，硫酸鎂水合物0.1-0.3%，瓊脂1-3%。

4.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（3）中所述的搖瓶發酵培養基的組分為：馬鈴薯汁30-50%，葡萄糖1-3%,硫酸鎂水合物0.1-0.3%，硫酸鈉0.03-0.08%，磷酸二氫鉀0.1-0.5%。

5.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（2）中所述的斜面培養基及步驟（3）中所述的搖瓶種子培養基均為在121℃條件下濕熱滅菌30-40min的培養基。

6.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（2）中所述的培養條件為：培養溫度25-28℃，培養時間3-5d。

7.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（3）中所述的培養條件為：搖床速度200-220r/min，培養溫度25-28℃，培養時間3-5d；步驟（4）中所述的超聲波細胞破碎時的操作條件為：功率為250-300W，溫度為20-25℃，時間為5-8min。

8.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（4）中所述的離心的速度為13000-150000r/min,離心時間為5-10min。

9.根據權利要求1所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，步驟（4）中所述的胃蛋白酶抑制劑的純化的具體方法為：采用DEAE-52離子交換層析，以流動相A液洗脫2倍柱床體積后，以20%B液梯度洗脫，取透析后的上清液上樣。

10.根據權利要求9所述的一種云芝發酵提取胃蛋白酶抑制劑的方法，其特征于，所述的流動相A液為0.02-0.05mol/L?,PH為6.5-7.0的磷酸鹽緩沖液，B液為0.5-0.8mol/L,PH為6.5-7.0的磷酸鹽緩沖液，所述的洗脫速度為0.8-1.0ml/min,上樣量為3ml。