[發明專利]一種開發小麥親緣物種特異分子標記的方法及應用

有效

• 申請號: 201410473529.5
• 申請日: 2014-09-16
• 公開（公告）號: CN104263826B
• 公開（公告）日: 2017-03-08
• 發明（設計）人: 亓增軍;李晨旭;劉志濤;莊麗芳
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司32218
• 代理人: 徐冬濤

技術領域

本發明屬于作物遺傳育種與農業生物技術領域，涉及一種用于開發小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標記的標記引物和方法，及該標記引物和方法的應用。

背景技術

小麥親緣物種中蘊含豐富的有利基因，是小麥遺傳改良的重要基因資源。遠緣雜交和染色體工程技術是轉移和利用小麥親緣物種有利基因的主要途徑。小麥親緣物種特異分子標記的開發有助于加快外源染色體中的有益基因向小麥轉移和利用。

基于PCR(polymerase?chain?reaction)的分子標記具有簡單、有效和經濟的特點，在分子標記輔助選擇中得到廣泛應用。目前，小麥親緣物種基于PCR的染色體特異分子標記的開發主要通過三個途徑，一是利用小麥中已經開發的標記直接在親緣物中通過擴增篩選，獲得小麥親緣物種特異標記(見參考文獻：陳華鋒,錢保俐,莊麗芳,陳全戰,馮祎高,裴自友,亓增軍,陳佩度,劉大鈞.普通小麥中國春-百薩偃麥草異染色體系的分子標記分析.作物學報,2007,33:1232-1239；Zhang?J-Y,Li?X-M,Wang?Richard?R.-C.,Cortes?A.,Rosas?V.and?A.Mujeebi-Kazi.Molecular?cytogenetic?characterization?of?Eb-genome?chromosomes?in?Thinopyrum?bessarabicum?disomic?addition?lines?of?bread?wheat.Plant?Sci,2002,163(1):167-174)；二是利用已經公開發表的小麥EST(expressed?sequence?tag)序列，通過比對分析，然后根據保守性區段設計引物擴增可變區開發的物種特異標記(Daniel?J.Mullan,Amanda?Platteter,Natasha?L.Teakle,Rudi?Appels,Timothy?D.Colmer,Joseph?M.Anderson,and?Michael?G.Francki,EST-derived?SSR?markers?from?defined?regions?of?the?wheat?genome?to?identify?Lophopyrum?elongatum?specific?loci.Genome,2005,48:811-822)；三是基于基因組測序為基礎開發的物種特異標記(見參考文獻：陳士強,秦樹文,黃澤峰,戴毅,張璐璐,高營營,高勇,陳建民.基于SLAF-seq技術開發長穗偃麥草染色體特異分子標記.作物學報,2013,39(4):727-734)。

隨著高通量測序技術的發展，通過轉錄組測序可以迅速獲得小麥親緣物種大量的基因EST序列，同時隨著越來越多的小麥基因組序列數據的公布，通過比對分析可以從小麥親緣物種的轉錄組序列中篩選獲得這些物種特異的EST序列，從而為設計該物種特異分子標記提供了可能。但是，經過檢索，并沒有發現通過高通量測序對小麥親緣物種百薩偃麥草的特異分子標記進行篩選研究。而百薩偃麥草由于具有強耐鹽、磷高效、抗病、分蘗強等多種優良性狀，如果能利用其基因進行小麥改良，對拓展栽培小麥遺傳基礎、培育高產耐逆品種具有重要的應用潛力。

發明內容

本發明的目的在于公開一種開發小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標記的標記引物和方法，為接下來其他小麥親緣物種特異分子標記的開發提供指導。

同時，通過本發明提供的標記引物和方法獲得百薩偃麥草特異分子標記，為將百薩偃麥草的優良基因向小麥轉移提供便利。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

本發明提供一種用于開發小麥親緣物種百薩偃麥草特異分子標記的標記引物，其序列如下所示：

1)lfz1725：上游引物TGGCTTTGTCATTGCCAGT；下游GCCATAACGGAGATCTGGAG；

2)lfz1728：上游引物CGCAGTCAAATCAAATGGAA；下游引物CTCCAGCTCGACGGAAGC；

3)lfz1730：上游引物TTGAACCCCGACTTTTTCAG；下游引物ATGTACCTCACCTCCCATGC；

4)lfz1731：上游引物CGCGATGAATAGTTTGAGCA；下游引物GACAGCGAATTTGGAGAAGC；

5)lfz1743：上游引物GATGTGTTTGTGCAGGTTGG；下游引物TGGGTTCAGGGAAGGATATG；