[發(fā)明專利]一種水皰性病檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410464737.9
• 申請日: 2014-09-15
• 公開（公告）號: CN104789694B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張強(qiáng);盧昌;趙志荀;吳國華;顏新敏;李應(yīng)國;岳華;周曉黎;李健;朱海霞;代雪玲;田波;蘆曉立;高順平;王曼
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司62102
• 代理人: 張晉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種可用于對多種病原微生物進(jìn)行檢測的引物、由這些引物構(gòu)成的試劑盒和制備方法，以及這種試劑盒非疾病診斷目的的使用方法，確切講本發(fā)明涉及一種可同時用于口蹄疫（A型、O型和Asia 1型）、豬水泡病和水皰性口炎檢測的的引物、由這些引物構(gòu)成的試劑盒和制備方法，以及這種試劑盒非疾病診斷目的的使用方法。

背景技術(shù)

口蹄疫（Foot-and-Mouth disease，F(xiàn)MD）是由小RNA病毒科( Picornaviridae) 口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的一種偶蹄動物急性接觸性傳染病，有O型、A型、C型、SATⅠ型（南非Ⅰ型）、SATⅡ型（南非Ⅱ型）、SATⅢ型（南非Ⅲ型）、Asia 1型（亞洲1型）等7個血清型。豬水皰病(Swine vesicular disease,SVD)是由小RNA病毒科(Picornaviridae) 腸道病毒屬( Enterovi rus)豬水皰病病毒（SVDV）引起的一種急性接觸性傳染病。水皰性口炎（Vesicular stomatitis，VS）是由水皰性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）引起的多種哺乳動物的一種急性、高度接觸性傳染病，以馬、牛、豬等動物較易感染，綿羊和山羊也可感染。這三種疾病能引起嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失并導(dǎo)致世界肉類市場的混亂，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病，我國農(nóng)業(yè)部將其列為一類動物疾病。然而，這三種病毒感染的動物均以舌、唇、口腔黏膜、乳頭和蹄冠等處上皮發(fā)生水皰為主要特征，在臨床癥狀上很難進(jìn)行區(qū)分。快速和可靠的診斷對于這三種疾病的控制和消滅至關(guān)重要，而且對肉食品中低含量的病毒、隱性感染或持續(xù)帶毒宿主進(jìn)行準(zhǔn)確檢測的方法，必須具備高敏感性、高特異性和高準(zhǔn)確性。常規(guī)的診斷方法如病毒分離、血清學(xué)試驗、動物試驗等，或費(fèi)時費(fèi)力，或特異性和敏感性不高，不能滿足快速、準(zhǔn)確診斷的要求。現(xiàn)有的RT-PCR、競爭PCR 和ELISA-PCR 方法克服了這些方法的不足，可用于這三種疾病的診斷，但也有費(fèi)時、易污染和每次檢測的樣品數(shù)量少等缺點(diǎn)。由于快速鑒別診斷結(jié)果有利于特定型疫苗的選擇和控制疫病蔓延，增強(qiáng)預(yù)防措施的有效性和實(shí)效性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種可克服現(xiàn)有技術(shù)不足的同時用于分型鑒別檢測口蹄疫A型、O型和Asia 1型病毒、水皰性口炎病毒和豬水泡病病毒的技術(shù)，具體講是聯(lián)合使用可用于檢測口蹄疫A型、O型和Asia 1型病毒、水皰性口炎病毒和豬水泡病病毒的引物，包括有這種引物的檢測試劑盒，及其制備方法和這種試劑盒非疾病診斷目的的使用方法。

本發(fā)明的用于檢測口蹄疫A型、O型和Asia 1型病毒的引物基因序列共10條，分別為：

SEQ ID No.1，可特異性擴(kuò)增口蹄疫A型病毒核酸的上游引物：AGGTGACACTATAGAATAGGGTGATCTAGGGTCTCTCGC，在本發(fā)明中被命名為FMDV-A-F；

SEQ ID No.2，可特異性擴(kuò)增口蹄疫A型病毒核酸的下游引物GTACGACTCACTATAGGGACAGGAGCTGCTTTGCAGGTGCAAT，在本發(fā)明中被命名為FMDV-A-R；

SEQ ID No.3，可特異性擴(kuò)增口蹄疫O型病毒核酸的上游引物：AGGTGACACTATAGAATAGTGACTGAACTGCTTTACCGCAT，在本發(fā)明中被命名為FMDV-O-F；

SEQ ID No.4，可特異性擴(kuò)增口蹄疫O型病毒核酸的下游引物：GTACGACTCACTATAGGGAGACATGTCCTCCTGCATCTG，在本發(fā)明中被命名為FMDV-O-R；

SEQ ID No.5，可特異性擴(kuò)增口蹄疫Asia 1型病毒核酸的上游引物：AGGTGACACTATAGAATAACTGCCTACCAGAAGCAACC；在本發(fā)明中被命名為FMDV-Asia 1-F；

SEQ ID No.6，可特異性擴(kuò)增口蹄疫Asia 1型病毒核酸的下游引物：GTACGACTCACTATAGGGAAGTATGTCTCCGCACGCTTC，在本發(fā)明中被命名為FMDV-Asia 1-R。