[發(fā)明專利]一種電化學(xué)膀胱癌DNA傳感器的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410457943.7 | 申請日： | 2014-09-05 |
| 公開（公告）號： | CN104297314A | 公開（公告）日： | 2015-01-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 許世超;張晨;張雪平;黃丹丹;王才富;鄭永彬 | 申請（專利權(quán)）人： | 天津工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | G01N27/327 | 分類號： | G01N27/327 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 300160*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 電化學(xué) 膀胱癌 dna 傳感器 制備 方法 | ||
1.一種電化學(xué)膀胱癌DNA傳感器，其特征在于：這種電化學(xué)膀胱癌DNA傳感器以玻碳電極為基底電極，依次進(jìn)行電極羧基化和探針單鏈DNA的組裝，其中玻碳電極羧基化是為了固定探針單鏈DNA，探針DNA是識別元件，生物連接劑是1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺。
2.權(quán)利要求1所述的電化學(xué)膀胱癌DNA傳感器的制備方法，所述方法包括：
(1)玻碳電極的羧基化：將玻碳電極浸入一定濃度的氫氧化鈉溶液中進(jìn)行表面羧基化，采用循環(huán)伏安法掃描一定圈數(shù)，掃描速度為1～200mV/s，掃描范圍-2～2V；
(2)單鏈DNA探針的組裝：用微量進(jìn)樣器取一定量的探針單鏈DNA和EDC/NHS連接劑滴加到電極表面，于0-50℃恒溫下密封靜置1-24小時，再依次用Tris-HCl緩沖液，pH為6.0-9.0，二次水沖洗電極表面以除去未組裝的探針單鏈DNA，進(jìn)而完成膀胱癌DNA傳感器的制備。
3.權(quán)利要求1所述的電化學(xué)膀胱癌DNA傳感器的制備方法，所述方法包括：
(1)玻碳電極的羧基化：將玻碳電極浸入一定濃度的氫氧化鈉溶液中進(jìn)行表面羧基化，采用循環(huán)伏安法掃描一定圈數(shù)，掃描速度為1～200mV/s，掃描范圍-2～2V；
(2)單鏈DNA探針的組裝：用微量進(jìn)樣器取一定量的探針單鏈DNA和EDC/NHS連接劑滴加到電極表面，于0-50℃恒溫下密封靜置1-24小時，再依次用Tris-HCl緩沖液，pH為6.0-9.0，二次水沖洗電極表面以除去未組裝的探針單鏈DNA，進(jìn)而完成膀胱癌DNA傳感器的制備；
(3)電化學(xué)膀胱癌DNA傳感器與目標(biāo)DNA的雜交：將上述單鏈DNA/GCE電極置于0.1-50ml一定濃度互補(bǔ)目標(biāo)DNA雜交液中，在一定溫度和時間下反應(yīng)后取出，依次用Tris-HCl緩沖液，pH為6.0-9.0，二次水沖洗電極表面除去未雜交的目標(biāo)DNA，即完成了DNA分子在電極表面的雜交。然后將得到的雙鏈DNA修飾的玻碳電極置于一定濃度的亞甲基藍(lán)溶液中浸泡一段時間，使得MB分子嵌入DNA雙鏈結(jié)構(gòu)中；將處理好的電極用Tris-HCl緩沖液，pH為6.0-9.0，二次水沖洗除去未反應(yīng)的MB分子；
(4)傳感器的電化學(xué)信號檢測：采用循環(huán)伏安法和差分脈沖伏安法進(jìn)行檢測，以不同修飾的金電極作為工作電極，鉑片電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，亞甲基藍(lán)為指示劑，應(yīng)用電化學(xué)工作站測試不同修飾電極的循環(huán)伏安曲線，差分脈沖伏安曲線。檢測底液均為一定濃度的Tris-HCl緩沖液，pH為6.0-9.0，掃描電位-2～2V，掃描速度為1-100mV/s。觀察峰型變化，記錄還原峰電流值。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，在步驟(1)之前，還應(yīng)對玻碳電極表面進(jìn)行預(yù)處理：先將玻碳電極在粒徑用氧化鋁泥漿拋光處理1-30min，然后在0.1-1.0mol/L硝酸，無水乙醇和超純水中依次超聲清洗1-10min，最后用高純氮氣吹干電極表面；處理后的玻碳電極在0.01-1.0mol/L硫酸溶液中通過電化學(xué)工作站進(jìn)行循環(huán)伏安法活化，符合要求后，在超純水中浸泡備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，在步驟(1)中，氫氧化鈉溶液為0.05～2mol/L，循環(huán)伏安法掃描圈數(shù)為1-50圈。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，在步驟(2)中，探針單鏈DNA的用量為0.1-100μl，EDC/NHS連接劑用量為KCl溶液為0.1-5ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，在步驟(3)中，雜交反應(yīng)溫度為10-100℃，反應(yīng)時間為1-10h，亞甲基藍(lán)溶液的濃度為1-100μmol/L，浸泡在亞甲基藍(lán)溶液中的時間為1-100min。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，在步驟(4)中，采用循環(huán)伏安法和差分脈沖伏安法進(jìn)行檢測，Tris-HCl緩沖液濃度為0.01-1mol/L。
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