[發明專利]一株產耐高溫高鹽脂肽的枯草芽孢桿菌TH-2及其用途

無效

• 申請號: 201410455701.4
• 申請日: 2014-09-09
• 公開（公告）號: CN104263681A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 林軍章;宋欣;王靜;高光軍;譚曉明;馮云;曹功澤;張守獻;宋永亭;汪衛東;曹嫣濱
• 申請（專利權）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石油化工股份有限公司勝利油田分公司采油工藝研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C09K8/582;C09K8/584;C12R1/125
• 代理公司: 北京世譽鑫誠專利代理事務所(普通合伙) 11368
• 代理人: 郭官厚

一、技術領域

本發明屬于微生物生物技術和環境生物技術領域，具體地說，它涉及一株枯草芽孢桿菌Bacillus?subtilis.TH-2菌株及其在微生物采油中的應用。?

二、背景技術

在能源日趨緊張的情況下，提高石油采收率已成為石油開采研究的焦點，近年來三次采油技術日益得到廣泛重視和現場應用，因此，三次采油驅油劑的研發也越來越引起科研工作者的關注，現在常用的驅油劑主要以化學表面活性劑，如：石油磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽和石油羧酸鹽等。?

目前，石油開采中驅油劑以化學表面活性劑為主，但由于化學表面活性劑耐溫耐鹽性能與油藏適應性差，產量降低，生產成本較高，環境污染，表/界面活性較差等問題，因此在一定程度上限制了其在現場應用。?

生物表活劑與化學表活劑相比具有如下優勢：首先，它們與一般的表面活性劑分子在結構上相似，在分子中不僅有脂肪烴鏈構成的非極性憎水基，而且含有極性的親水基，但生物表面活性劑通常比合成表面活性劑擁有更為復雜和龐大的分子結構，單個分子占據更大的空間，而顯示較低的臨界膠團濃度；其次，它們能顯著地降低表面張力、改善界面性質，在極端苛刻條件下仍具有良好的選擇性和專一性，相?容性好，無毒，能被微生物降解，因此具備高效、環保的特性，并且不以石油為原料，在石油開采、環境治理等領域應用越來越廣泛。特別是在石油開采過程中可以直接利用微生物發酵液，省去分離純化過程，因而可大幅度降低成本，較石化產品有明顯的價格優勢。?

三、發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)TH-2菌株和該菌在微生物采油中的應用。?

本發明提供的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)TH-2菌株，以下簡稱TH-2，于2014年1月9日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”(北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所)，其保藏編號為CGMCC?No.8695。?

本發明提供的枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695菌株，是從勝利油田油水井樣品中通過血平板和擴油圈方法篩選得到，并通過耐溫耐鹽性能考察反復篩選傳代獲得。?

枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695的形態學特性：在好氧固體培養基下培養1～2天出現大小一般為0.5～1.0mm乳白色菌落，細胞形態為短桿狀，大小2-5μm×0.5-1.0μm。?

枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695的生理生化特性：好氧，生長溫度37～50℃，生長pH值范圍4～9，最佳生長pH范圍7～7.5，NaCl的耐受性0～3％。?

枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695的營養培養基：葡萄糖20g/L，尿素3g/L，酵母粉1g/L，磷酸氫二鉀3g/L，氯化鈉5g/L，?pH值為7.0-7.5。?

枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695發酵條件：接種量8％，接種齡12h，初始pH7.5，溫度37℃，攪拌速度200rpm，pH＝7，體積15m³，通氣量：2L/min。?

枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695在常溫常壓、上述營養培養基和發酵條件下產量最高達到2.4g/L。?

枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695發酵液的性能評價參數：耐溫性、耐鹽性、乳化性能、表面張力、物理模擬實驗提高采收率值。?

枯草芽孢桿菌TH-2CGMCC?No.8695發酵生產的脂肽類表面活性劑的性能參數評價方法：?

(1)耐溫性能測定?

取已經配制好的不同濃度表面活性劑溶液，在恒溫器中加熱到150℃維持兩個小時后，60℃下測其表界面張力。?

(2)耐鹽性能測定?

分別用不同濃度的NaC1溶液配制生物表活劑，配制后觀察是否有渾濁和沉淀產生。?

(3)乳化性能測定?

以石蠟做模型油相，配制不同濃度的生物表面活性劑溶液，分別將25mL的生物表面活性劑溶液與25mL油相加入到50mL的比色管中，然后在震蕩器上充分混合3min后，在60℃下靜止，記錄乳化情況。?

(4)表面張力測定?

用蒸餾水將液體樣品配制成質量分數為1％的溶液，固體樣品配制成質量分數為0.3％的溶液，按GB/T5549的規定用掛片法測定。?

(5)物理模擬驅油評價?

①填裝模擬巖心；?

②抽真空、飽和地層水，測定巖心孔隙度；?

③飽和原油，巖心老化7天；?