[發(fā)明專利]一種用于五種細(xì)菌的復(fù)合增菌培養(yǎng)基及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410450436.0
• 申請(qǐng)日: 2014-08-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104195086B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張巖;劉銘;李云;葛少林;邢婉麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 博奧生物集團(tuán)有限公司;清華大學(xué);廣東粵檢生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/42;C12R1/445;C12R1/19;C12R1/63;C12R1/01
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于致病菌的前增菌培養(yǎng)基，特別是涉及到一種同時(shí)對(duì)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)

食源性致病菌是食物中毒和食源性疾病暴發(fā)的重要因素，是食品安全的重要風(fēng)險(xiǎn)隱患。據(jù)世界衛(wèi)生組織(World?Health?Organization,?WHO)報(bào)道，全球每年發(fā)生腹瀉病的病例數(shù)高達(dá)1.5億，其中70%病例與各種致病性微生物污染的食品有關(guān)。我國(guó)研究資料顯示，微生物病原引起的食源性疾病占46.4%，嚴(yán)重危及人們的健康，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌是食源性疾病的主要致病菌，是食品安全風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)和危害評(píng)估中重要監(jiān)測(cè)項(xiàng)目。

目前我國(guó)食品安全標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌時(shí)，需要經(jīng)過(guò)前增菌、選擇性增菌、分離培養(yǎng)、生化鑒定、和血清學(xué)鑒定等步驟。培養(yǎng)基品種繁多，操作麻煩，工作量大，耗時(shí)長(zhǎng)，無(wú)法滿足現(xiàn)代檢測(cè)快速、高通量的要求，給食品生產(chǎn)企業(yè)和質(zhì)檢單位造成較大壓力。所以在食品安全問(wèn)題日益被人們所重視的今天，研制出滿足快速檢測(cè)的多種致病菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基迫在眉睫。

關(guān)于多種致病菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基的研究，近年來(lái)已受到國(guó)內(nèi)外研究人員的廣泛關(guān)注。Hyochin等研制的選擇性營(yíng)養(yǎng)肉湯(?SEL)，可同時(shí)富集沙門氏菌、大腸埃希氏菌和單增李斯特菌，當(dāng)接種量為10²CFU/mL，經(jīng)過(guò)12h復(fù)合培養(yǎng)后，菌體濃度可達(dá)到10⁶～10⁸CFU/mL，可直接應(yīng)用于多重PCR擴(kuò)增(Hyochin?Kim?and?Arun?K.?Bhunia.SEL,?a?Selective?Enrichment?Broth?for?Simultaneous?Growth?of?Salmonella?enterica,?Escherichia?coliO157H7,?and?Listeria?monocytogenes[J].Applied?and?Environmental?Microbiology,2008,74(15):4853-4866.?)；翁思聰?shù)妊兄频倪x擇性增菌肉湯(?SSSV)，可同時(shí)富集沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌，當(dāng)接種量為10²CFU/mL，經(jīng)過(guò)8h復(fù)合培養(yǎng)后，菌體濃度可達(dá)到10⁵～10⁶CFU/mL，可直接應(yīng)用于多重PCR擴(kuò)增（翁思聰,朱軍莉,馮立芳,勵(lì)建榮.1?種選擇性富集沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌共增菌培養(yǎng)基SSSV研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)2013,13(1):19-28.）；劉園園等研制的選擇性增菌肉湯(?SSL)，?可同時(shí)培養(yǎng)沙門氏菌、單增李斯特菌和金黃色葡萄球菌，當(dāng)接種量為10²CFU/mL，經(jīng)過(guò)24h復(fù)合培養(yǎng)后，菌體濃度可達(dá)到10⁷～10⁸CFU/mL，可直接應(yīng)用于熒光PCR擴(kuò)增（劉園園,肖性龍,余以剛,陳谷,李曉鳳,唐語(yǔ)謙,吳暉.一種能同時(shí)富集沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌的培養(yǎng)基[J].?微生物學(xué)報(bào),?2009,49?(10)?:1389?–?1396.）。此外，還有UPB（通用預(yù)增菌肉湯）、BPW(緩沖蛋白胨水)、NB（營(yíng)養(yǎng)肉湯）等通用培養(yǎng)基，可同時(shí)增殖多種細(xì)菌，但還沒(méi)有適用于沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌五種致病菌且組分簡(jiǎn)單、制備簡(jiǎn)便的復(fù)合增菌培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種可同時(shí)培養(yǎng)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌的培養(yǎng)基，適用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量檢測(cè)，用于所述五種病原菌的篩查。

本發(fā)明的目的通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復(fù)合增菌培養(yǎng)基，以質(zhì)量份數(shù)計(jì)，其原料配方組成為：牛腦浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化鈉2.5-7.5份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1.5-3.5份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，七葉苷1-3份，蒸餾水1000份，pH值為7.2-7.5。