[發明專利]一種HPLC法分離測定帕立骨化醇原料藥及制劑中有關物質的方法

有效

• 申請號: 201410441459.5
• 申請日: 2014-09-01
• 公開（公告）號: CN105467021B
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 管璐晗;趙靜;陳李平
• 申請（專利權）人: 重慶華邦制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 黎昌莉

本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種采用高效液相色譜法分離和測定帕立骨化醇原料藥及制劑中有關物質的方法，所述的方法是采用正相液相色譜法，使用的色譜柱固定相的極性大于流動相的極性，采用該正相液相色譜法測定供試品溶液中各物質的峰面積，按照峰面積歸一化計算各物質的相對含量。本發明的方法與現有技術相比，具有專屬性強，帕立骨化醇與各雜質分離較好等特點，可用于帕立骨化醇原料藥及其軟膠囊制備過程中雜質的檢測和質量控制。

技術領域

本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種采用高效液相色譜法分離和測定帕立骨化醇原料藥及制劑中有關物質的方法。

背景技術

帕立骨化醇為維生素D活性物質骨化三醇的類似物，用于預防和治療繼發性甲狀旁腺功能亢進癥(SHPT，主要表現為PTH升高)，帕立骨化醇分子式為C₂₇H₄₄O₃，化學名為(7E，22E)-19-去甲基-9，10-開環麥角甾-5，7，22–三烯-1α，3β，25-三醇，其結構式如下：

帕立骨化醇的注射制劑于1998年上市，目前已成為透析患者最廣泛使用的SHPT預防及治療藥物。帕立骨化醇的1、2和4mcg膠囊制劑也由FDA批準用于預防和治療繼發性甲狀旁腺功能亢進癥，它對接受透析和移植手術前的Ⅲ及Ⅳ期慢性腎臟疾病(CKD)患者的SHPT顯示出預防及治療療效，帕立骨化醇的膠囊制劑為口服制劑，通過口服途徑給藥，與注射制劑相比使用更為便利，給藥后可降低甲狀旁腺激素(PTH)水平，同時對血鈣及血磷水平具有最小影響，PTH降低是SHPT治療療效的一個關鍵性指標。

USP37版帕立骨化醇原料藥質量標準以及USP37版帕立骨化醇注射液質量標準均采用反相高效液相色譜法來檢測有關物質，本申請的發明人用這兩種標準用于帕立骨化醇膠囊制劑有關物質的檢測均存在一定的局限性，原因在于：(1)帕立骨化醇軟膠囊中油性基質輔料峰較多，且輔料峰出峰范圍在10min到30min之間，輔料峰較大，嚴重干擾本品有關物質的檢測；(2)由于產品規格很低，稀釋進樣后，不能滿足雜質檢出限水平；(3)采用反相液相色譜法測定有關物質時，基質對主峰有一定的溶解能力，連續進樣后，主峰保留時間依次減少，在梯度洗脫中延長100％乙腈沖洗時間達30min，都不能完全抑制。因此，目前還沒有獲得帕立骨化醇軟膠囊的質量標準。

發明內容

基于上述反相色譜法測定帕立骨化醇軟膠囊的缺點，本申請的發明人建立了一種正相液相色譜法，該方法采用梯度洗脫，提高了雜質檢測的靈敏度，適用于帕立骨化醇軟膠囊及其原料藥的質量控制。

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種HPLC法分離測定帕立骨化醇原料藥及制劑中有關物質的方法，該方法與現有的反向色譜法相比，能更準確、高效的測定帕立骨化醇原料藥及制劑中的有關物質。

為實現上述目的，本發明的技術方案為：

一種HPLC法分離測定帕立骨化醇原料藥及制劑中有關物質的方法，所述HPLC法為正相HPLC法，所述正相HPLC法分析過程中采用的色譜柱固定相的極性大于流動相的極性。

進一步，所述HPLC法具體為：制備供試品溶液，采用高效液相色譜測定供試品溶液中各物質的峰面積，按照峰面積歸一化計算各物質的相對含量。

在本發明的一個具體實施例中，所述的色譜柱采用的是硅膠填料的色譜柱，所述硅膠填料粒徑為3-5μm，優選5μm。色譜柱的長度為150mm-250mm，優選用250mm的色譜柱。

在本發明的一個具體實施例中，所述的流動相是采用流動相A和流動相B進行梯度洗脫，所述的流動相A為正己烷，所述的流動相B為正己烷與具2-3個碳原子的醇的混合物。

進一步，所述流動相B中醇與正己烷的體積比為10-25：75-90，優選為20:80。

優選的所述醇為乙醇和/或異丙醇。