[發明專利]一種丙型肝炎病毒第一高變區融合抗原及其應用

有效

• 申請號: 201410439852.0
• 申請日: 2014-09-01
• 公開（公告）號: CN104193827B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 續薇;陳振;丁兆明;王巖;歐蘭香;王佳穎;寇宗陽;丁興龍;王恒;朱之煒
• 申請（專利權）人: 山東萊博生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;G01N33/68;G01N33/576
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司37219
• 代理人: 王緒銀

技術領域

本發明涉及丙型肝炎病毒抗原，尤其涉及一種丙型肝炎病毒第一高變區(HVR1)融合抗原及其在制備丙型肝炎病毒HVR1抗體檢測試劑盒中的應用。

背景技術

丙型肝炎病毒(hepatitis?C?virus，HCV)感染最顯著的臨床特征就是引起慢性感染，約有70％的丙肝有可能發展成慢性肝炎，20％發展成肝硬化，12％發展成肝癌，危害十分地嚴重。全世界約有1.7億人攜帶HCV，預計我國HCV感染者4300萬，而且每年的新發病例數不斷上升，感染率約為3.2％。

自1989年HCV基因獲得克隆以來，人們一直在致力于疫苗的研究工作，但因病毒RNA在血液含量較低且非常不穩定，HCV基因組變異率較高(目前主要分為6種基因型：HCV1～HCV6)，病毒準種多，缺乏理想的體外感染細胞模型，導致預防性疫苗缺乏保護性抗體，不能阻止患者再次感染，使得疫苗研究進展緩慢，至今未能研制出有效的丙肝疫苗，造成了丙肝預防上的困難，發病率正呈逐漸上升趨勢，流行范圍也逐漸擴大。血液篩查是我國目前主要采取來控制丙肝蔓延的手段。這使得研究開發丙型肝炎病毒檢測試劑盒十分迫切并具有重要的臨床意義。

HCV基因組長約9.6kb,編碼一個長約3000個氨基酸殘基的多聚蛋白前體，在宿主信號肽酶和病毒自身編碼蛋白酶的作用下生成4種結構蛋白(C、E1、E2、p7)和6種非結構蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)，其中E1、E2為包膜糖蛋白，是中和抗體的主要靶抗原。丙型肝炎病毒第一高變區(HVR1，hypervariable?region?1)位于E2包膜蛋白的N端，約27個殘基，是HCV整個基因組中的變異最大的區域，并隨著感染者體內免疫壓力的變化HVR1序列呈現出不同的動態變化。目前，克隆測序的HVR1序列已經多達上千種，呈現出很強的多樣性和復雜性。由于HVR1含有HCV重要的中和性抗原表位，感染者早期出現抗HVR1抗體與疾病的自愈有關(Zibert?A,Meisel?H,Kraas?W,et?al.Early?antibody?response?against?hypervariable?region?1?is?associated?with?acute?self-limiting?infections?of?hepatitis?C?virus.Hepatology.1997；25(5):1245-9.)。因此，對HVR1抗體的檢測較HCV其他區抗體檢測更具有臨床診斷意義。然而，由于HVR1變異的復雜性，對HVR1抗體的檢測目前主要通過對HVR1-RNA的釣取，合成相應的HVR1多肽進行檢測。上述方法可以直接檢測到相應的變異株的HVR1抗體。但由于HCV感染者存在RNA間歇陽性及早期病毒滴度低的特點，上述方法無法普遍應用于大多數HCV感染的HVR1抗體檢測。

進一步研究發現HVR1抗原并不是嚴格的株特異性，而具有一定的交叉活性，即一條HVR1抗原可以和多份不同的HCV血清發生陽性反應。因此，可以通過獲得一條能囊括大部分變異株的HVR1抗原解決膜區抗原的變異問題。美國Chiron公司在即將推出的第四代HCV免疫診斷試劑盒中，就加入了一段具有高交叉反應性的HVR1模擬肽，該抗原在臨床HCV患者的血清中的交叉范圍為69％，但在獻血員HCV陽性血清中的覆蓋面只能達到39％，遠低于C區抗體的檢測率(65％)。這顯然是不能滿足HCV診斷中對包被抗原的活性要求。修冰水等研究獲得了12條重組HVR1肽抗原，用隨機選擇的27份我國HCV陽性血清進行交叉反應性檢測，發現每條重組HVR1均和不止一份的陽性血清有反應。選擇其中4條適合我國的交叉反應性較好的重組HVR1，其交叉反應率可覆蓋27份陽性血清的25份(92.5％)(修冰水,凌世淦,宋曉國,張賀秋等丙型肝炎病毒第一高變區代表序列重組肽的交叉性研究，軍事醫學科學院院刊，2002，26(2)：93-98。軍事醫學科學院基礎醫學研究所，專利號:ZL?01141879.6)。基于此，利用篩選丙型肝炎病毒主要基因型的HVR1區序列，通過基因重組的方法，將篩選的基因型HVR1區抗原融合成一條融合多肽，獲得了一條具有覆蓋HCV所有基因型、高交叉反應的HVR1融合抗原有著極大的臨床應用和開發前景。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明要解決的問題是提供一種丙型肝炎病毒第一高變區(HVR1)融合抗原及其在制備丙型肝炎病毒HVR1抗體檢測試劑盒中的應用。

本發明所述丙型肝炎病毒第一高變區融合抗原，其特征在于：所述融合抗原氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，具體描述是：