[發明專利]農藥殘留檢測用酶源及其應用

在審

• 申請號: 201710717490.0
• 申請日: 2017-08-21
• 公開（公告）號: CN107746838A
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發明（設計）人: 付會兵;古瑞琴;陳凌飛;鐘克創;劉紅霞;張書成;于蘭天;張杰強
• 申請（專利權）人: 鄭州煒盛電子科技有限公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12Q1/46;C12Q1/44;G01N21/77;G01N21/78
• 代理公司: 鄭州德勤知識產權代理有限公司41128
• 代理人: 王莉

技術領域

本發明屬于生物技術應用領域，具體地，涉及一種農藥殘留檢測用酶源及其應用。

背景技術

我國是一個農業大國，在經濟的不斷發展中，農業起著非常重要的作用，但是農藥殘留是一個重要的問題，近年來，農藥殘留對人們健康的影響日益受到關注。2003年國家頒布了農藥殘留的有關標準并給出標準的農殘快速檢測方法，而且一直以來農藥殘留的檢測是以儀器分析為主，但檢測裝置價格昂貴，分析檢測時間過長限制了該方法的推廣應用。隨著科技的發展，農藥殘留的快速檢測逐漸被人們認知并接受，目前使用較多的農藥殘留檢測卡是膽堿酯酶與靛酚乙酸酯反應變色指示農藥殘留的多少，但是該方法中膽堿酯酶活性不穩定，底物價格較貴，檢測成本較高，限制了其的普遍推廣應用。因此，開發一種高效、便捷、成本低的農藥殘留檢測方法具有重要的意義。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種農藥殘留檢測用酶源及其應用，以解決上述問題。

具體地，本發明采取如下技術方案：

一種農藥殘留檢測用酶源，它包括均勻混合的生物酶、酶活性促進劑、磷酸鹽緩沖溶液和表面活性劑，其中，所述生物酶為丁酰膽堿酯酶、乙酰膽堿酯酶或植物酯酶，所述酶活性促進劑為可溶性鎂鹽、可溶性鋅鹽、可溶性鈣鹽或至少兩種的組合。

基于上述農藥殘留檢測用酶源，它包括8～30U/ml的所述生物酶、12～30mmol/L的所述酶活性促進劑、100～300mmol/L的所述磷酸鹽緩沖溶液和10～30μl/L的所述表面活性劑。

基于上述，所述酶活性促進劑包括10～20mmol/L的可溶性鎂鹽和3～6mmol/L的可溶性鈣鹽。

基于上述，所述丁酰膽堿酯酶為雞血清丁酰膽堿酯酶、馬血清丁酰膽堿酯酶或驢血清丁酰膽堿酯酶；所述乙酰膽堿酯酶為魚腦乙酰膽堿酯酶或蒼蠅頭部乙酰膽堿酯酶；所述植物酯酶為小麥植物酯酶。

基于上述，所述磷酸鹽緩沖溶液的是由磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀制得的緩沖溶液，且pH值為5～8。

基于上述，所述磷酸鹽緩沖溶液是由磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉制得的緩沖溶液，且pH值為5～8。

基于上述，所述表面活性劑為吐溫-80、十二烷基磷酸酪、卞苯氧基氯化銨或至少兩種的組合。

一種農藥殘留檢測卡，它包括載體和設置在所述載體上的酶片和底物片，所述酶片上含有上述的農藥殘留檢測用酶源。

基于上述，所述載體由厚度為0.012～0.017mm的聚丙烯層和厚度為0.003～0.008mm的聚氯乙烯層貼合而成，所述酶片和所述底物片間隔置于所述聚氯乙烯層上。

優選的，PVC層選用含背膠的PVC膜，以便聚氯乙烯層和聚丙烯層相貼合。

基于上述，所述底物片上的底物為吲哚酚乙酸酯、乙酸-a-奈酯、乙酰膽堿、乙酸羥基吲哚、碘化硫代乙酰膽堿、溴化硫代乙酰膽堿、氯化硫代乙酰膽堿或2,6-二氯靛酚乙酸酯。

所述農藥殘留檢測用酶源的制備方法包括以下步驟：先將所述生物酶溶于磷酸鹽緩沖溶液中，再加入所述酶活性促進劑和表面活性劑混合均勻，得到所述農藥殘留檢測用酶源。

所述農藥殘留檢測卡的使用包括以下步驟：將農藥殘留洗脫液滴2～3滴于所述酶片上進行預反應10min，然后將所述農藥殘留檢測卡對折手指輕捏所述底物片與所述酶片重合，3min后打開農藥殘留檢測卡，觀察顏色，判定結果。

與現有技術相比，本發明具有突出的實質性特點和顯著進步，具體的說，本發明提供一種農藥殘留檢測用酶源，它包括生物酶、酶活性促進劑、磷酸鹽緩沖溶液和表面活性劑，其中，所述酶活性促進劑選自可溶性鎂鹽、可溶性鋅鹽、可溶性鈣鹽，所述酶活性促進劑及表面活性劑的加入，使酶分子的構象發生變化，酶的活性位點凸顯，更有利于酶與底物的結合，同時所述酶活性促進劑的加入也可以降低酶催化反應所需要的能量，使得酶催化反應可以更容易進行。因此，將該農藥殘留檢測用酶源用于有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留檢測可以有效提高檢測的精確度，擴大檢測范圍，從而使得使用該農藥殘留檢測用酶源的檢測卡具有較高的檢測精確度和較寬的檢測范圍。同時，本發明還提供含有該農藥殘留檢測用酶源的檢測卡，該檢測卡的載體由聚丙烯(PP)層和聚氯乙烯(PVC)層貼合而成，使得所述載體軟硬適中，不易損壞或過硬造成劃傷，且該檢測卡用底物廉價易得，可以有效降低檢測成本。

具體實施方式

下面通過具體實施方式，對本發明的技術方案做進一步的詳細描述。

實施例1