[發明專利]一種制備高純度米爾貝肟的方法

有效

• 申請號: 201410429785.4
• 申請日: 2014-08-27
• 公開（公告）號: CN105440049B
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 何勇崴;謝云;張洪蘭
• 申請（專利權）人: 北大醫藥重慶大新藥業股份有限公司;北大方正集團有限公司;北大醫療產業集團有限公司
• 主分類號: C07D493/22
• 分類號: C07D493/22
• 代理公司: 北京萬象新悅知識產權代理事務所(普通合伙)11360
• 代理人: 李稚婷

1.一種制備高純度米爾貝肟的方法，包括以下步驟：

1)將含有米爾貝霉素A3和米爾貝霉素A4組份的發酵液進行固液分離，然后用第一溶媒萃取菌渣，得到含有米爾貝霉素A3和米爾貝霉素A4組份的提取液；

2)將提取液濃縮后上硅膠柱層析，并用第一溶媒和第二溶媒的混合溶液進行洗脫，得到含有米爾貝霉素A3和米爾貝霉素A4組份的解吸液；

3)將步驟2)所得解吸液濃縮，去除溶劑，然后用二氯甲烷溶解濃縮物并進行氧化反應，所用氧化劑是活性二氧化錳、氯鉻酸吡啶鹽或重鉻酸吡啶鹽，得到含有米爾貝霉素A3酮和米爾貝霉素A4酮的二氯甲烷溶液；

4)將步驟3)得到的溶液經活性炭吸附脫色后進行濃縮，濃縮物用第一溶媒溶解，上硅膠柱層析，用第一溶媒和第二溶媒的混合溶液進行洗脫，得到含有米爾貝霉素A3酮和米爾貝霉素A4酮組份的解吸液，然后濃縮結晶，分離出結晶體；

5)對結晶體進行肟化反應，加入水終止反應后加入二氯甲烷萃取，得到含有米爾貝霉素A3肟和米爾貝霉素A4肟的二氯甲烷溶液；

6)將含有米爾貝霉素A3肟和米爾貝霉素A4肟的二氯甲烷溶液去除溶劑，用第三溶媒的水溶液溶解，進行樹脂層析，然后將解吸液按照米爾貝霉素A3肟和米爾貝霉素A4肟含量比例為1:4進行混合，得到解吸混合液；

7)用庚烷萃取解吸混合液，得到含有米爾貝霉素A3肟和米爾貝霉素A4肟的庚烷溶液，然后去除溶劑，再用第三溶媒溶解，加水降溫進行結晶，固液分離、干燥得到米爾貝肟晶體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一溶媒為庚烷或甲苯；所述第二溶媒為丙酮或丁酮；所述第三溶媒為乙醇或甲醇。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)第一溶媒萃取菌渣的用量為菌渣重量的8～10倍，萃取溫度為30～40℃。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)將提取液濃縮至米爾貝霉素A3和米爾貝霉素A4組份的濃度為10～15g/L，并通過除菌板除菌后再上硅膠柱；所用硅膠粒徑為100～400目，干硅膠粉末的使用量為米爾貝霉素A3和米爾貝霉素A4組份重量的50～100倍；洗脫所用第一溶媒和第二溶媒的體積比為80:20～95:5。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)使用針用活性炭，其加入量為米爾貝霉素A3酮和米爾貝霉素A4酮總質量的2～3倍；活性炭加入后保持二氯甲烷溶液的溫度為30～35℃攪拌1～2小時，然后通過除菌板去除活性炭，得到澄清的含有米爾貝霉素A3酮和米爾貝霉素A4酮的二氯甲烷溶液；然后將該澄清溶液濃縮去除溶劑，用第一溶媒溶解，上硅膠柱層析，所述硅膠粒徑為100～400目，干硅膠粉末的使用量為米爾貝霉素A3酮和米爾貝霉素A4酮組份重量的50～100倍；洗脫所用第一溶媒和第二溶媒的體積比為5:1～11:1。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5)肟化反應方法為：將步驟4)所得結晶體用無水乙醇完全溶解后，將鹽酸羥胺的水溶液緩慢加入該乙醇溶液中，攪拌混合并保持溶液溫度為20～25℃，反應1小時以上，直到米爾貝霉素酮完全轉變成米爾貝霉素肟后終止反應。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟6)樹脂層析所用樹脂為苯乙烯-聚苯乙烯系列的非極性大孔樹脂；樹脂層析所使用的上柱液為第三溶媒的水溶液，其中第三溶媒的體積百分含量為55％～60％；樹脂層析所使用的解吸液為第三溶媒的水溶液，其中第三溶媒的體積百分含量為60％～70％，且高于上柱液中第三溶媒的體積百分含量。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟7)具體過程是：先在解吸混合液中加入兩倍解吸混合液體積的水，再用庚烷進行萃取，得到含有米爾貝霉素A3肟和米爾貝霉素A4肟的庚烷溶液；然后將該庚烷溶液去除溶劑后加入第三溶媒進行溶解，得到米爾貝霉素A3肟和米爾貝霉素A4肟總濃度為20g/L～50g/L的溶液；再緩慢加入體積為第三溶媒體積3～4倍的水，降低溶液溫度到10～20℃，緩慢攪拌結晶；最后固液分離、真空干燥得到米爾貝肟結晶體。