[發明專利]一種低分子量肝素親和純化介質和純化低分子量肝素方法

無效

• 申請號: 201410419993.6
• 申請日: 2014-08-22
• 公開（公告）號: CN104190383A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 黃佳瑩;許雯;曹林
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/28;C08B37/10
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種低分子量肝素親和純化介質、由該介質形成的親和純化聚乙烯亞胺葡萄聚糖微球及低分子量肝素親和純化方法。

背景技術

肝素鈉是豬的腸粘膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質。肝素是有六糖或八糖重復單位組成的線性鏈狀分子。三硫酸雙糖單位是肝素的主要雙糖單位，L-艾杜糖醛酸是此雙糖的糖醛酸，二硫酸雙糖的糖醛酸是D-葡萄糖醛酸，三硫酸雙糖和二硫酸雙糖以約3：1的比例交替聯結。肝素鈉白色粉末，有引濕性，對熱穩定。溶于水，不溶于丙酮等有機溶劑。分子量一般在8000～25000道爾頓，平均分子量約為13000道爾頓，肝素是趨于螺旋形的纖維狀分子，與其它粘多糖相比，其特性粘度較小，為0.1～0.2，有旋光性。肝素在185～200nm有特性吸收峰，在230～300無光吸收。如有雜蛋白在，則最大吸收在265～292nm，最小吸收在240～260nm。肝素在紅外890、940cm-1有特征吸收峰，測定1210～1150cm-1吸收強度，可作快速分析用。肝素的O-硫酸基在低溫時對酸水解相當穩定，但N-硫酸基對酸水解敏感。在堿性條件下，N-硫酸基相當穩定。肝素與氧化劑反應，可能被降解成酸性產物。還原劑的存在，不影響肝素的活性。肝素具有抗凝血作用，肝素在體內外均能延長凝血時間，肝素能降低LDL、VLDL和乳糜微粒(CM)，升高HDL，對防止動脈粥樣硬化有多方面的有益作用，肝素能減少紅細胞的凝聚作用，使全血粘度和血漿粘度降低，有利于防止血栓性疾病。

普通肝素用于臨床至今已有近70年的歷史，近年來其地位逐漸被近十年發展起來的新一代肝素類抗凝藥物——低分子量肝素所取代。低分子量肝素具有效價高，副作用低的優點。目前，低分子量肝素已經占據了肝素類藥品市場的絕大部分比重(90％)。

目前國外市場已有8種低分子量肝素藥物上市，分別為依諾肝素鈉、那曲肝素鈣、亭扎肝素鈉、帕肝素鈉、達肝素鈉、貝米肝素鈉、舍扎肝素鈉、阿地肝素鈉等。化學法生產低分子量肝素主要是利用亞硝酸鈉、雙氧水等化學試劑降解肝素，化學法是隨機降解，沒有選擇性，特異性差，會作用于肝素分子的抗凝活性五糖核心基團，使得抗Factor?Xa活性下降，產生沒有抗凝效果的副產物，因此需要對低分子量肝素進行高效的純化，提高效價，降低副作用風險。

目前，低分子肝素鈉的純化主要是基于氧化法，以有機溶劑分級沉淀獲得，這類方法存在以下缺陷：1.氧化劑難以清除；2.低分子肝素鈉的結構易于破壞。因此，限制了大規模快速高效制備低分子量肝素鈉的生產。

發明內容

本發明的目的是解決現有技術中的不足，提供一種高效、快速可大規模分離純化低分子肝素鈉的介質和方法。

本發明的目的通過以下技術方案實現

1、本發明提供一種低分子量肝素親和純化介質，該介質包含三個組成部分：聚乙烯亞胺、交聯物質和微球結構；其中，交聯物質包括交聯劑和表面活性劑，微球結構包括微球和微球載體。

2.上述1提供的低分子量肝素親和純化介質，其中，聚乙烯亞胺為分枝狀形式；交聯劑為5-胺基－1－戊醇，1,4-丁二醇雙丙烯酸酯，1,3-丁二醇雙丙烯酸酯或1,3-丁二醇雙丙烯酸酯的衍生物；微球為葡萄聚糖。

3.上述2提供的低分子量肝素親和純化介質，其中，表面活性劑為葉酸聚氧乙烯醚類，微球載體大小為150-200微米。

4.包括上述1-3任一項提供的低分子量肝素親和純化介質的親和純化聚乙烯亞胺葡萄聚糖微球，其中，親和純化聚乙烯亞胺葡萄聚糖微球的分子量為13萬至20萬道爾頓。

5.上述4提供的親和純化聚乙烯亞胺葡萄聚糖微球在純化低分子量肝素上的應用。

6.本發明還提供一種純化低分子量肝素的方法，該方法包括如下步驟：5％氯化鈉溶液使肝素降解產物低分子量肝素粗品完全溶解；鹽酸調節pH至4.0-5.0；加入親和純化聚乙烯亞胺葡萄聚糖微球，攪拌，靜置沉淀12小時，微球沉淀后去除上清，1M的氯化鈉漂洗2次，然后用2M氯化鈉洗脫；在溶液中加入10％質量比的固體氯化鈉攪拌溶解。向濃縮液中加入體積比35-50％的乙醇，靜置2小時收沉淀得純化的低分子量肝素。

本發明的有益效果：