[發明專利]一種定量檢測蠟蚧輪枝菌的選擇性培養基及其應用

有效

• 申請號: 201410419374.7
• 申請日: 2014-08-25
• 公開（公告）號: CN104212874A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 張艷軍;謝明;彭德良
• 申請（專利權）人: 張艷軍;謝明
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬微生物領域，具體涉及一種定量檢測蠟蚧輪枝菌的選擇性培養基及其應用。

背景技術

蠟蚧輪枝菌(Lecanicillium?Lecanii)是重要的蟲生真菌，對刺吸式害蟲具有很好的防治效果，該菌在西歐、蘇、美、中等許多國家和地區已有廣泛應用。眾所周知，生防菌對作物害蟲的防治效果與生防菌的施用時間、單次施用劑量、施用次數密切相關，因此，針對不同作物或生境制定適宜的生防菌施用方法顯得尤為重要。生防菌在自然界中天然存在，研究其田間種群自然波動規律，以及人工投放施用后生防菌的延續或存活狀況，對指導生防菌使用具有重要指導意義。土壤是生防菌的最主要宿存場所，同時也是所有微生物的主要活動場所，因此，生防菌土壤宿存的研究首先要排除土壤其它微生物的干擾。針對土壤中蟲生真菌的研究方法有限，主要有選擇性培養基、蟲餌誘菌法和PCR檢測法。具體到蠟蚧輪枝菌來說，蟲餌誘菌中的誘蟲對蠟蚧輪枝菌不敏感，無法對蠟蚧輪枝菌有效誘集。理論上，PCR法可通過設計引物或探針特異性地檢測靶標菌的核酸，然而土壤腐殖酸、微生物及其代謝物往往嚴重干擾PCR的檢測靈敏度，此外，PCR法也無法僅可以反映靶標菌的核酸狀況，無法反應靶標菌活菌的狀況。選擇性培養基可有效反應靶標菌活菌的狀況，已成功應用于白僵菌、綠僵菌等，而蠟蚧輪枝菌的選擇性培養基依然缺乏。目前，蠟蚧輪枝菌在田間延續與存活的基礎研究相當缺乏，不利于指定適宜于的蠟蚧輪枝菌使用方法，嚴重制約了該菌的應用與推廣。

發明內容

本發明的目的是解決現有技術的不足，提供一種定量檢測蠟蚧輪枝菌的選擇性培養基及其應用方法，能有效排除土壤雜菌干擾，從而快速準確的對蠟蚧輪枝菌的活菌量進行檢測，該培養基具備價格低廉、制備方便的優點

本發明的另一目的在于提供上述選擇性培養基的應用。

為了實現以上目的，本發明采用如下技術方案：一種蠟蚧輪枝菌選擇性培養基，每升該選擇性培養基由如下組分組成：燕麥片10-20g，瓊脂粉15-20g、細菌抑菌劑0.1-1.0g、真菌抑菌劑0.1-1.0g和蒸餾水1000ml。

作為一種優選方案，每升上述選擇性培養基由如下組分組成：燕麥片15g，瓊脂粉17g、細菌抑菌劑0.5g和真菌抑菌劑0.5g。

本發明所述的細菌抑菌劑為硫酸鏈霉素、氯霉素、青霉素中的一種或它們的混合物。

本發明所述的真菌抑菌劑為十二烷基胍醋酸鹽、十六烷基三甲基溴化銨、多菌靈中的一種或它們的混合物。

上述蠟蚧輪枝菌選擇性培養基的制作方法：稱取燕麥15-20g，倒入鍋中，加蒸餾水煮30分鐘，用4層紗布過濾去殘渣，濾液加入瓊脂粉15-20g和真菌抑菌劑0.1-1.0g，再次煮沸，蒸餾水定容到1000ml，121℃高壓濕熱滅菌25min，待培養基冷卻至不燙手時，加入細菌抑菌劑0.1-1.0g，充分混勻后，倒入滅過菌的直徑約9cm的培養皿中，每皿約20mL，冷凝后低溫保存備用，保存時間不超過2周。

本發明選擇性培養基可以用于定量檢測蠟蚧輪枝菌。檢測方法是：以選擇性培養基制備平板，將待測樣品稀釋后取50-100μl涂布于平板上，25℃黑暗培養2-5天，培養完畢后進行計數。

與現有技術比較，本發明具有如下有益效果：利用抗生素對細菌的抑殺作用，排除細菌對靶標真菌檢測的干擾；利用不同真菌對真菌抑菌劑的敏感性存在差異的特性，以及不同真菌對碳源利用能力的差異，消除待測樣品中其他真菌的影響；該培養基具有制備簡單、組分易得，價格低廉的優點。

具體實施方式

下面通過實施例的方式進一步說明本發明，并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。

實施例1：一種定量檢測蠟蚧輪枝菌的選擇性培養基，其特征在于：燕麥15g，倒入鍋中，加蒸餾水煮30分鐘，用4層紗布過濾去殘渣，濾液加入瓊脂粉17g和十六烷基三甲基溴化銨0.5g，再次煮沸，蒸餾水定容到1000ml，121℃高壓濕熱滅菌25min，待培養基冷卻至不燙手時，加入氯霉素0.5g，充分混勻后，倒入滅過菌的直徑約9cm的培養皿中，每皿約20mL，冷凝后低溫保存備用，保存時間不超過2周。