[發明專利]人血清CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法

無效

• 申請號: 201410417807.5
• 申請日: 2014-08-22
• 公開（公告）號: CN104198728A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 張健;盧奕;李會強;黃昕;郭宏偉;鄒春林
• 申請（專利權）人: 廣西南寧隆吉維特生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N33/532;G01N33/535
• 代理公司: 北京華凱弘信專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 李丙林;張玲

技術領域

本發明涉及免疫學檢測領域，具體而言，涉及一種人血清 CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法。

背景技術

趨化因子(chemokines,CK)是具有多種生物學功能的小分子蛋 白質，是細胞因子家族中非常重要的成員。CK分子中均有4個保 守的半胱氨酸(C)，根據其氨基端(N端)前兩個半胱氨基酸位置 將趨化因子分為4類：C類、CC類、CXC類和CX3C類，相應受 體分別稱為CR、CCR、CXCR與CX3CR。目前，所發現的趨化因 子主要屬于CXC類和CC類。趨化因子及其受體分子作為控制靶點， 可用于相關疾病的控制和治療。

CXCL16是一種獨特的CXC趨化因子，以跨模型和可溶性兩種 形式存在。全長的CXCL16是1個跨膜型趨化因子，由4個結構域 組成，即：趨化結構域、糖基化黏蛋白樣柄、單螺旋的跨膜結構域 及胞漿結構域，前兩者相連接形成胞外區域。CXCR6是CXCL16 的唯一受體，主要在記憶性T細胞、B細胞、樹突狀細胞和激活的 CD₈⁺T淋巴細胞中表達。

趨化因子與靶細胞表面七次跨膜的G蛋白偶聯受體相結合，通 過信號轉導途徑介導細胞遷移。腫瘤組織中趨化因子及受體為腫瘤 細胞生長、黏附及定向遷移提供條件，與腫瘤轉移密切相關。 CXCL16在細胞外液形成一定濃度梯度引導CXCR6(+)靶細胞定 向游走,快速募集靶細胞進行應答，穩定CXCR6(+)細胞遷移和 組織歸巢。在肉瘤、膠質瘤、惡性黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、食道 癌、卵巢癌、宮頸癌等癌細胞中均存在CXCR6的過度表達。CXCL16 在細胞外液形成一定濃度梯度引導CXCR6(+)靶細胞定向游走， 快速募集靶細胞進行應答，穩定CXCR6(+)細胞遷移和組織歸巢。 此外研究表明，CXCL16在動脈粥樣硬化、風濕免疫疾病及其他炎 癥性疾病中起重要作用。

可見CXCL16無論是對炎癥的評估還是對腫瘤的監測都有很高 的價值，將其作為疾病的指標的研究也越來越受到重視。目前國外 已有測定CXCL16的ELISA試劑盒面試，但多為僅供科研應用，因 操作耗時等因素還不適合用于臨床，如R&D?Systems的 Immunoassay?DCX160系列。而國內測定CXCL16的ELISA試劑盒， 雖然價格適中，但試劑盒質量不穩定，靈敏度和準確度都達不到臨 床應用的要求。

因此，為了解決現有技術中的上述不足，本發明提出了一種新 的解決方案。

發明內容

為了解決現有技術中的上述問題，本發明一方面提供了一種人 血清CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒，另一方面提供了上述人血清 CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒的制備和使用方法。根據本發明提供 的人血清CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒，成本低，穩定性好，具有 較高的靈敏度和準確度；根據本發明另一方面提供的上述人血清 CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒的制備和使用方法，操作簡單，步驟 簡化，用時較短。

本發明一方面提供了一種人血清CXCL16酶聯免疫檢測試劑 盒，包括：包被有羊抗人CXCL16單克隆抗體的酶標反應板， CXCL16標準品，生物素標記抗人CXCL16抗體，鏈酶親和素標記 辣根過氧化物酶。

優選地，所述CXCL16標準品由重組人CXCL16制備，共6瓶， 其含CXCL16的濃度范圍為0-10ng/ml；所述生物素標記抗人 CXCL16抗體的濃度125-250ng/ml。

進一步地，所述人血清CXCL16酶聯免疫檢測試劑盒還包括洗 滌液，稀釋液，顯色液A、顯色液B和終止液。

進一步地，所述洗滌液為含吐溫的磷酸鹽緩沖液，所述稀釋液 為含BSA的磷酸鹽緩沖液，所述顯色液A為含H₂O₂的磷酸鹽檸檬 酸緩沖液，所述顯色液B為含TMB的檸檬酸緩沖液，所述終止液 為1-2M的H₂SO₄溶液。

本發明另一方面提供了所述人血清CXCL16酶聯免疫檢測試劑 盒的制備方法，包括包被有羊抗人CXCL16單克隆抗體的酶標反應 板的制備，CXCL16標準品的制備，生物素標記抗人CXCL16抗體 的制備，鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶的制備。