[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于異槲皮甙含量鑒別蜂花粉的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410403217.7
• 申請(qǐng)日: 2014-08-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104198636A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周金慧;李熠;孫麗萍;吳黎明;徐響
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蜂花粉的鑒別方法，具體涉及基于異槲皮甙鑒別蜂花粉的方法。

背景技術(shù)

蜂花粉是蜜蜂從蜜源植物的雄蕊中采集的花粉，加上蜜蜂自身的腺上分泌物、唾液和花蜜形成的不規(guī)則扁圓形的團(tuán)狀物。蜂花粉含有多種氨基酸、維生素、礦物元素、不飽和脂肪酸、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、碳水化合物，多酚類(lèi)和黃酮類(lèi)物質(zhì)、多糖、酶類(lèi)、核酸、激素等活性物質(zhì)，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。蜂花粉因其成分多樣而富有多種活性功能，不僅對(duì)治療貧血有特殊的療效，對(duì)于治療前列腺疾病也有較好的療效；還具有抗癌、抗輻射、降血脂、防治心腦血管疾病的作用；此外，蜂花粉對(duì)于治療習(xí)慣性便秘、胃腸病、肝病、神經(jīng)衰弱均有功效；同時(shí)，蜂花粉對(duì)保護(hù)皮膚和美容有明顯的作用，可除去多余的脂肪達(dá)到減肥美體的目的，其提取物還具有保濕、抗氧化、調(diào)理皮膚和頭發(fā)的功效(孫麗萍，田文禮，朱曉麗等.蜂花粉功能食品的研究思路.中國(guó)養(yǎng)蜂，2006，57(10):39-40)。

蜂花粉中各成分的含量如下：蛋白質(zhì)20-25％、碳水化合物40-50％、脂肪5-10％、礦物質(zhì)2-30％、木質(zhì)素10-15％、未知物質(zhì)10-15％，黃酮類(lèi)物質(zhì)是蜂花粉中重要的功效組分，也是保健食品中的主要成分。

目前一些不法商家將價(jià)格較低的蜂花粉摻入價(jià)格較高的蜂花粉中賺取高額利潤(rùn)，但是由于大多數(shù)的蜂花粉顏色，味道非常相近，所以很難對(duì)市場(chǎng)的蜂花粉進(jìn)行鑒別。通常根據(jù)植物來(lái)源對(duì)蜂花粉進(jìn)行分類(lèi)，所以不同蜂花粉之間的營(yíng)養(yǎng)成分和生物學(xué)功能均存在一定差異。

已有的研究報(bào)道中鑒別花粉品種的方法為：感官檢驗(yàn)，顯微鏡鏡檢，比色法、紫外分光光度法、高效液相色譜-大氣壓電離質(zhì)譜法(LC-TSP-MS)、膠束毛細(xì)管電泳法(MECC)和高效液相色譜法(HPLC)(以下內(nèi)容摘錄自蜂花粉中黃酮類(lèi)化合物的檢測(cè)及純化方法的研究，該文獻(xiàn)是中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院孫麗萍撰寫(xiě)的碩士論文，2005年10月公開(kāi))。其中：

感官檢驗(yàn)主要通過(guò)眼看蜂花粉的顏色和品嘗味道來(lái)鑒別種類(lèi)，但是很多蜂花粉顏色差異比較小乃至肉眼很難分辨，不同的人觀察后也會(huì)認(rèn)為是不同的顏色；一些種類(lèi)的蜂花粉均具有微甜的味道，很難通過(guò)品嘗分辨其種類(lèi)，所以該方法最大的缺點(diǎn)是鑒別能力的準(zhǔn)確度低，容易受人為因素的影響；

在電子顯微鏡下來(lái)源于不同植物的花粉大小和形狀存在一定的差異，因此，可以通過(guò)顯微鏡下的輪廓圖鑒定植物的種類(lèi)。但是在顯微鏡下很多蜂花粉的形態(tài)非常接近，這容易造成鑒別方法主觀性強(qiáng)，準(zhǔn)確性低；

比色法是在堿性溶液中加Al³⁺與3-羥基黃酮、5-羥基黃酮進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，利用顏色和含量關(guān)系進(jìn)行比色測(cè)定的方法，該法用于組成單一的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物時(shí)，結(jié)果準(zhǔn)確，但當(dāng)應(yīng)用于組分復(fù)雜的植物試樣時(shí)，比如花粉黃酮提取液，由于受到花色素、鞣酸及其它酚性成分等多種物質(zhì)的干擾，而且底液常常出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，因此測(cè)定結(jié)果明顯偏高，而且測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性不好。

紫外分光光度法：是利用黃酮類(lèi)化合物在紫外區(qū)有較強(qiáng)吸收，利用適當(dāng)?shù)膶?duì)照品進(jìn)行黃酮的測(cè)定。為了消除一些水溶性的強(qiáng)極性物質(zhì)的干擾，將樣品用聚酰胺進(jìn)行了分離提純，再采用紫外分光光度法測(cè)定，此為聚酰胺-紫外分光光度法。

高效液相色譜法：一種方法是采用樣品直接進(jìn)樣，梯度洗脫，高效液相色譜分析，測(cè)定樣品所含黃酮苷類(lèi)成分，但是由于黃酮苷類(lèi)種類(lèi)多，不可能一次分離，而且很多都沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物可對(duì)照，很難定量；另一種方法是通過(guò)測(cè)定水解苷元含量來(lái)計(jì)算黃酮苷的量，其測(cè)定原理是：蜂花粉黃酮主要成分是以黃酮苷形式存在，經(jīng)酸水解后生成黃酮醇類(lèi)化合物，其主要是槲皮素、異鼠李素和山奈酚三種成分，，用HPLC分離測(cè)定這三種苷元的含量，再用計(jì)算方式轉(zhuǎn)換成相應(yīng)蜂花粉黃酮苷的含量。

利用薄層色譜法可分離分析蜂花粉中的維生素，由斑點(diǎn)的數(shù)目、形狀、顏色、熒光及Rf值比較，從而鑒別蜂花粉種類(lèi)(楊夢(mèng)蘭，李忠奇，王偉等.TLC法鑒別花粉種類(lèi)，廣東公安科技，2000，3：16-19)，但是該方法中使用了大量的具有揮發(fā)性的有毒有害試劑，如氯仿，冰醋酸，二氯甲烷和氨水等，而且根據(jù)Rf值和顏色鑒別也具有主觀性強(qiáng)，準(zhǔn)確性低等缺點(diǎn)。