[發明專利]一種有抑制酪氨酸酶活性的漆樹多酚提取物及其制備方法

在審

• 申請號: 201410402087.5
• 申請日: 2014-08-15
• 公開（公告）號: CN104147064A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 王成章;陳虹霞;葉建中
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林產化學工業研究所
• 主分類號: A61K36/22
• 分類號: A61K36/22;A61K8/97;A61P17/00;A61Q19/02
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及一種有抑制酪氨酸酶活性的漆樹多酚提取物及其制備方法，屬于天然藥物、化妝品技術領域。

背景技術

漆樹（Rhus?verniciflua?stokes），為漆樹科（Anacardiaceae）漆樹屬（(Toxicodendron）的一種落葉喬木。?漆樹是我國重要的特用經濟林，生漆是天然樹脂涂料，素有“涂料之王”的美譽。它還是一種優良的藥用木材，漆樹的葉、花、根、皮、果實、干漆和木心都可入藥，有止咳、消癖、通經、殺蟲、消腫等功效。漆樹木質部位的多酚化合物是繼生漆漆酚、漆多糖后的主要活性物，大量的研究表明其具有優良的抗氧化性、抗腫瘤、抑菌和免疫調節等作用。

據調研了解，我國化妝品市場以每年15%左右的速度增長，2011年已突破2000億大關，我國目前是全球第三大化妝品市場。根據市場研究公司?Euromonitor的數據顯示，在我國的皮膚護理品市場中，美白產品占據了71%的份額。目前市場上銷售的許多美白、祛斑產品都是以抑制酪氨酸酶達到美白作用，從而促使了與酪氨酸酶抑制劑相關研究的蓬勃發展。由于酪氨酸酶抑制劑在化妝品中的廣泛使用，研究可以長期使用、安全、有效的藥物將成為人們要考慮的主要問題。世界各國植物資源豐富，天然資源因其藥效溫和、不良反應小而被廣泛認同，天然酪氨酸酶抑制劑的開發將成為化妝品領域一個備受矚目的課題。

酪氨酸酶(EC?1.14.18.1,?Tyrosinase)廣泛分布于微生物、動植物以及人體中。酪氨酸酶具有獨特的雙重催化功能：催化?L-酪氨酸羥基化轉變為?L-多巴和氧化?L-多巴形成多巴醌，是生物體內黑色素合成的關鍵酶，與人的衰老、昆蟲的傷口愈合與發育、果蔬的褐變等有密切關系。其活性異常過量表達可導致人體的色素沉著性疾病(如雀斑、黃褐斑、老年斑等)。

我國是漆樹的原產地，主要集中在陜西、四川、重慶、湖北、貴州、甘肅和云南七個省，在鎮雄、大方、畢節、赫章、北川、恩施等?60?多個縣建立了漆樹產業化種植基地，種植面積達100萬hm2，栽種漆樹達150,000?萬株。但是目前漆樹的產業主要集中在天然生漆涂料的生產及開發，在漆籽的利用方面也比較薄弱，另外在漆樹生長、利用過程中，大量的枝椏莖材未得到利用，為了擴大漆樹產業的規模化，延伸漆樹資源的產業鏈，因此開展漆樹多酚的提取制備和生物活性研究，對于漆樹資源的開發利用具有指導意義。已知的國內外文獻對漆樹多酚的的研究主要集中在抗腫瘤、抑菌和抗氧化等方法，對漆樹多酚抑制酪氨酸酶活性的研究與開發尚屬空白。

發明內容

為實現上述目的，發明了一種有抑制酪氨酸酶活性的漆樹多酚提取物及其制備方法，其特征在于由以下步驟組成：

（1）提取

將漆樹木材干燥、粉碎，去渣，按質量體積比為1:5~1:30(g:mL)，加入質量分數為50~95%的乙醇水溶液，常溫或加熱回流提取、或減壓回流提取、或超聲波輔助提取或微波輔助提取2~3次，每次10min~10h，過濾，濾液合并，于40~60℃下減壓蒸發除去溶劑，再經真空干燥或冷凍干燥，得到粗提物；

（2）萃取

粗提物按質量比1:5~1:10(g:mL)加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取3~5次，分離，在40~60℃下減壓蒸發除去溶劑，得到石油醚萃取物；水層繼續用乙酸乙酯萃取3~5次，分離，在40~60℃下減壓蒸發除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯相;

（3）大孔樹脂純化

將乙酸乙酯相按質量比1:5~1:10(g:mL)加入質量分數為10%的乙醇水溶液，超聲震蕩溶解，加入大孔吸附樹脂，先用質量分數為10~20%的乙醇水溶液進行洗脫，洗至無色，這部分收集液不用，以除去極性大的雜質，再用質量分數為30~60%的乙醇水溶液進行洗脫，洗脫劑用量為3-6倍住體積，收集洗脫液，于40~60℃下減壓蒸發除去溶劑，干燥，即得漆樹多酚提取物；

（4）提取物多酚含量和化學成分分析

將漆樹多酚提取物進行化學成分分析，總多酚含量為50~60%，經HPLC分析，漆樹多酚提取物的主要化學成分為漆黃素含量為0.4~0.7%，黃顏木素含量為5~10%，硫黃菊素含量為0.5~1%和紫鉚花素含量為0.2~0.5%，漆酚的含量<5PPm;

（5）提取物抑制酪氨酸酶活性

將漆樹多酚提取物進行抑制酪氨酸酶活性研究，當濃度范圍在400~600ug/mL，抑制率為60~80%，其IC50值為308μg/mL。通過對抑制酪氨酸酶活性的機理研究，其抑制類型為混合型。