[發明專利]一種快速分析氨基酸混合物的方法

有效

• 申請號: 201410400994.6
• 申請日: 2014-08-14
• 公開（公告）號: CN104155378A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 李國艷;孫建華;李園;劉銅梅;熊媛媛
• 申請（專利權）人: 蚌埠豐原醫藥科技發展有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，尤其涉及一種使用高效液相色譜法快速分析氨基酸混合物的方法。

背景技術

氨基酸已廣泛應用于食品、藥品中，經研究發現，有些藥物中常含有多種氨基酸，各種氨基酸中有關物質主要是其他氨基酸，目前采用的方法中多為薄層色譜法，定性和定量都比較困難，尤其是其他氨基酸，含量在0.1％左右時，薄層板上看不出雜質斑點。氨基酸比例多少直接影響了制劑的質量，從而影響藥物的藥效。在色譜分離過程中，色譜柱、柱溫、流速、流動相的pH都會影響到色譜分離效果，例如：高柱溫、大流速都可能使出峰時間提前，然而傳統硅膠色譜柱在高溫下工作會加快色譜柱的老化，縮短柱壽命，加大流速則會使系統反壓升高，而通過改變梯度則要求在色譜柱、柱溫、流速等色譜條件相對固定的條件下進行，因此要能同時使多種氨基酸化合物在比較短的時間內達到快速分離，色譜柱顯得非常關鍵。

酰胺鍵合硅膠色譜柱在反相條件下，可以有效的保留極性化合物，是一種嶄現出比氨基柱更好的穩定性，更好的分離效果，酰胺鍵合硅膠比氨基鍵合硅膠具有更低的背景噪音。在現有的檢測氨基酸的方法中大多采用氨基鍵合硅膠柱，存在不能同時實現多種氨基酸的有效分離，色譜柱的使用壽命短、成本高等缺點。

發明內容

針對現有技術不足，本發明的目的是提供一種快速分析氨基酸混合物的方法，為氨基酸的質量控制提供有效的分析手段，并用于檢測氨基酸類化合物。

為實現上述目的，本發明提供一種快速分析氨基酸混合物的方法，將待測氨基酸混合物用溶劑稀釋成供試品溶液，然后采用高效液相色譜法進行氨基酸混合物的分析，色譜柱采用酰胺鍵合硅膠柱。

優選的，所述供試品溶液中氨基酸混合物濃度為0.01～1mg/mL。

優選的，所述流動相由無機鹽水溶液與色譜純有機溶劑混合而成，所述無機鹽水溶液與所述色譜純有機溶劑混合的體積比為35:65～40:60。

優選的，所述無機鹽水溶液與所述色譜純有機溶劑混合的體積比為40:60～50:50。

優選的，所述無機鹽水溶液的濃度為0.03～0.1mol/L。

優選的，所述無機鹽水溶液在制備中加入氨水，再用磷酸調pH值至4.0～4.6；進一步優選的，pH值為4.0±0.5；pH范圍以4.0±0.1最佳；現有技術中調節pH在6.0左右，會縮短酰胺柱的使用壽命。

優選的，所述無機鹽為磷酸鈉鹽、磷酸鉀鹽或磷酸二氫鹽；優選的，所述磷酸二氫鹽為磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉或磷酸氫二鉀。

優選的，所述色譜純有機溶劑為醇類或腈類；優選的，所述色譜純有機溶劑為甲醇或乙腈。

使用酰胺柱，用上述流動相進行洗脫，能實現各色譜峰的有效分離、分析靈敏度高、結果準確可靠、方法簡便快捷，可用于氨基酸類物質或含氨基酸雜質的藥物的分析檢測。解決了一般液相分析方法的不足。

優選的，所述高效液相色譜法的檢測波長為UV205～400nm；波長為205nm最佳，在此波長下，大多氨基酸類物質均有吸收。

優選的，設置的柱溫為20～40℃；進一步優選的，柱溫為25℃；

優選的，設置流動相的流速為0.6mL/min～2.5mL/min；進一步優選的流速為0.7mL/min～1.0mL/min。

優選的，一種快速分析氨基酸混合物的方法包括以下步驟：

1)制備磷酸二氫鹽水溶液，加入氨水，用水稀釋后，再用磷酸調節pH值至4.0～4.5，將緩沖鹽溶液作為無機鹽水溶液；加入氨水后形成的緩沖鹽能夠穩定溶液的pH，略呈酸性的pH值有利于提前保留時間，提高分析的效率，同時可以延長酰胺柱的使用壽命。

2)將無機鹽水溶液與乙腈按35:65～40:60的體積比混合，制得流動相；優選的，無機鹽水溶液與乙腈體積比為40:60，溶解樣品所用溶劑為65％乙腈的水溶液(體積比)。而現有技術無機鹽溶液濃度高，在實際操作過程中，鹽易結晶，對色譜柱和儀器的損傷都較大。

3)將氨基酸混合物用65％乙腈的水溶液稀釋成濃度為0.01～1mg/mL的供試品溶液；所用溶劑為65％乙腈的水溶液，有利于消除溶劑峰干擾，同時利于保護色譜柱。

4)取供試品溶液適量，注入高效液相色譜儀中，使用酰胺鍵合硅膠柱，用流動相進行洗脫，檢測波長為UV205～400nm，記錄液相色譜圖；所采用的酰胺鍵合硅膠柱比氨基鍵合硅膠具有更低的背景噪音，有利于保護色譜柱。

與現有技術相比，本發明具有以下優點：

1、同時方便的檢出多種氨基酸并能達到良好分離；