[發(fā)明專利]用Alu重復(fù)序列基因擴增引物且無需DNA抽提的檢測血漿游離DNA的定量PCR方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410400571.4 | 申請日： | 2014-08-14 |
| 公開（公告）號： | CN105463064A | 公開（公告）日： | 2016-04-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王曉慧 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海體育學(xué)院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 200438 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | alu 重復(fù) 序列 基因 擴增 引物 無需 dna 檢測 血漿 游離 定量 pcr 方法 | ||
1.一種用Alu重復(fù)序列基因擴增引物且無需DNA抽提的檢測血漿游離DNA的定量PCR方法，其特征是選用人類基因中表達最豐富的Alu重復(fù)序列基因，設(shè)計的擴增引物是：正向：5’-atcctggctaacacggtgaa-3’，反向5’-gatctcggctcactgcaag-3’擴增產(chǎn)物152bp；在訓(xùn)練前、訓(xùn)練后即刻采血，選擇指尖血或靜脈血20μ，肝素或EDTA抗凝，離心、收集血漿，血漿稀釋5倍；無需DNA抽提進行定量PCR擴增；比較訓(xùn)練前、訓(xùn)練后即刻的血漿游離DNA水平。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用Alu重復(fù)序列基因擴增引物且無需DNA抽提的檢測血漿游離DNA的定量PCR方法，其特征在于定量PCR的反應(yīng)體系：MaximaSYBRGreen/ROXqPCRMasterMix(2x)，12.5μl；正向和反向引物(50μM)，各0.2μl；標準品或5倍稀釋后的樣品，各1.0μl；不含DNA酶的水，11.1μl。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用Alu重復(fù)序列基因擴增引物且無需DNA抽提的檢測血漿游離DNA的定量PCR方法，其特征在于擴增條件：95℃預(yù)變性8min，然后進行40個循環(huán)的擴增，分別是95℃變性30秒，55℃退火40秒和72℃延伸1分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用Alu重復(fù)序列基因擴增引物且無需DNA抽提的檢測血漿游離DNA的定量PCR方法，其特征在于是增加訓(xùn)練后多個時間點的血漿游離DNA水平檢測，動態(tài)觀察血漿游離DNA水平或過度訓(xùn)練的恢復(fù)過程。
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