[發明專利]一種十數樟組織培養快繁方法

有效

• 申請號: 201410393484.0
• 申請日: 2014-08-11
• 公開（公告）號: CN104145819A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 呂世友;張玲玲
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

技術領域

本發明涉及分子生物學實驗中植物組織培養技術，尤其涉及一種十數樟組織培養快繁方法。

背景技術

十數樟（Warburgia?ugandensis）是非洲特有藥用植物，該植物的樹枝在非洲被用作“牙棒”，具有廣譜抗菌活性。從十數樟提取的天熱植物類抗菌劑，將有助于開發一系列的保健品，尤其是保健牙膏，將來可用于口腔的保健。本發明建立了十數樟組織培養再生體系，可為下游提取分析藥用活性成分提供充足的植物材料。經檢索，到目前為止，現有技術中還沒有專門針對十數樟組織培養的報道。

發明內容

本發明的目的就在于提供一種十數樟組織培養快繁方法，即通過建立十數樟組織培養的快繁體系，獲得大量十數樟小苗，為下一步從十數樟中提取分析藥用活性成分提供充足的植物材料。

本發明的目的是這樣實現的：

1、本方法包括下列步驟：

①外植體消毒

用于愈傷誘導的外植體為靠近葉柄處的嫩葉基部或嫩芽基部；

外植體消毒采用0.1%升汞消毒6min后倒掉廢液，又用新的0.1%升汞消毒6min后倒掉廢液，再使用無菌水沖洗6～8次；

②愈傷誘導

愈傷誘導所用的培養基為：MS?+?1.6mg/L?6BA?+?1mg/L?IBA?+?0.1mg/L?TDZ；?

③芽分化

芽分化所用培養基為：MS?+?1.6mg/L?6BA?+?0.2mg/L?IBA；

④小苗的伸長

小苗伸長所用培養基為：MS?+?0.4～0.8mg/L?6BA?+?0.1mg/L?IBA，將芽分化培養基上獲得的叢生芽，分割成小塊接種于該培養基上；

⑤根的誘導

第一步，根原基誘導培養基為：1/2MS?+?0.4mg/L?NAA+?0～1mg/L?IBA；

第二步，根伸長培養基為1/2MS?+?0.3%活性炭；

⑥煉苗及移栽

煉苗及移栽按常規方法。

工作原理：

植物細胞具有全能性，具有通過脫分化再分化生成完整植株的能力。通過在不同階段施加不同配比的外源生長調節劑，例如細胞分裂素，使得植物細胞逐步分化成完整植株。

????2、本方法的用途

我們的前期研究發現，非洲傳統藥用植物——十數樟的提取物具有良好的抗細菌和抗真菌作用；且作為一種天然植物類抗菌劑，不會產生耐藥性。

本方法可獲得大量十數樟小苗，用于下游提取分析藥用活性成分以及園林綠化等。

本發明具有下列優點和積極效果：

能將從非洲引進的十數樟通過組織培養快速繁殖獲得大量小苗，從而為下游提取十數樟活性藥用成分提供充足的植物材料，加快口腔保健品的開發進程。

附圖說明

圖1是愈傷的照片；

圖2.1是叢生芽的照片——球狀叢生芽橫切后兩個半球照片，a是挨著空氣的球面，b是位于培養基內部的球面；?

圖2.2是叢生芽的照片——球狀叢生芽橫切面位置的照片；

圖3是叢生苗的照片；

圖4.1是誘導根的照片——根原基誘導培養基上發生的白色根點的照片；

圖4.2誘導的根的照片——根伸長培養基上培養5天左右根的照片。

英譯漢：

1、6BA：6-芐基氨基嘌呤；

2、IBA：吲哚乙酸；

3、TDZ：噻重氮苯基脲；

4、NAA：萘乙酸。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例詳細說明：

一、方法

①外植體消毒

用于愈傷誘導的外植體為靠近葉柄處的嫩葉基部或嫩芽基部；

多次實驗證明該部位出愈率高，而葉片其它部位（包括未展開的嫩葉）在傷口處可發生愈傷，但出愈率較低。

外植體消毒采用0.1%升汞消毒6min后倒掉廢液，又用新的0.1%升汞消毒6min后倒掉廢液，再使用無菌水沖洗6～8次；

②愈傷誘導

愈傷誘導所用的培養基為：MS?+?1.6mg/L?6BA?+?1mg/L?IBA?+?0.1mg/L?TDZ；接種1周即可看到外植體開始膨大，逐步形成黃綠色的愈傷（局部有黑褐色）

見圖1；

③芽分化

芽分化所用培養基為：MS?+?1.6mg/L?6BA?+?0.2mg/L?IBA；