[發明專利]一種用于擴增子測序的建庫方法無效
| 申請號： | 201410391037.1 | 申請日： | 2014-08-11 |
| 公開（公告）號： | CN104153004A | 公開（公告）日： | 2014-11-19 |
| 發明（設計）人： | 林芹;于丹;李勝彬;陳華;陶曄;曾亮 | 申請（專利權）人： | 上海美吉生物醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06;C40B40/06 |
| 代理公司： | 上海晨皓知識產權代理事務所(普通合伙) 31260 | 代理人： | 成麗杰 |
| 地址： | 201314 上海*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 擴增 子測序 方法 | ||
1.一種用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)PCR擴增富集目標區域：對待測樣品基因組DNA，針對目標區域設計引物序列，所述引物序列在正向引物和反向引物的5’端設有隨機堿基序列和接頭序列，進行PCR擴增，回收PCR產物；
(2)PCR擴增引入測序接頭：將步驟(1)所得到的PCR產物進行混樣，設計引物序列，所述引物序列包含與步驟(1)中的接頭序列互補的序列，對混樣進行PCR擴增，回收PCR產物，即得到用于擴增子測序的DNA文庫。
2.根據權利要求1所述的用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，在所述步驟(2)之后還包括測序并對測序數據進行生物信息學分析的步驟。
3.根據權利要求1所述的用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，在所述步驟(1)之前還包括提取待測樣品基因組DNA的步驟。
4.根據權利要求1所述的用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，步驟(1)中回收PCR產物時采用凝膠電泳法切膠回收目的條帶。
5.根據權利要求1所述的用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，步驟(2)中在將PCR產物進行混樣后還包括磁珠純化的步驟。
6.根據權利要求1所述的用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，步驟(2)中的引物序列中，在正向引物的5’端帶有P5序列；在反向引物的5’端帶有Index序列和P7序列。
7.根據權利要求1所述的用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，步驟(2)中回收PCR產物時采用磁珠法或凝膠電泳法。
8.根據權利要求2所述的用于擴增子測序的建庫方法，其特征在于，所述測序步驟通過一代測序平臺或高通量測序平臺進行。
9.一種用于擴增子測序的DNA文庫，其根據權利要求1至8任一項所述的方法構建得到。
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