[發(fā)明專利]對(duì)索拉非尼具有耐藥性或敏感性的人肝癌細(xì)胞系及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410384329.2
• 申請日: 2014-08-06
• 公開（公告）號(hào): CN105331584A
• 公開（公告）日: 2016-02-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡剛;張一心;劉繼斌;方后順;楊雪艷;湯旭蓁;謝付波
• 申請（專利權(quán)）人: 上海睿智化學(xué)研究有限公司;南通市腫瘤醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 薛琦

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞系領(lǐng)域，特別涉及對(duì)索拉非尼具有耐藥性或敏感性的人肝癌細(xì)胞系及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

原發(fā)性肝癌具有發(fā)病例高、預(yù)后較差及病死率高等特點(diǎn)，是常見的惡性腫瘤的一種。據(jù)最新的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，肝癌全球新發(fā)例數(shù)約74.8萬，死亡病例69.6萬，而其中半數(shù)發(fā)生在中國。其發(fā)病例和死亡率在男性腫瘤患者中分別居于第5位，第2位；在女性腫瘤患者中分別居于第7位和第6位(JemalA,BrayF,CenterMM,FerlayJ,WardE,FormanD.Globalcancerstatistics,2011.CACancerJClin2011；61(2):69-90.陳建國,陳萬青,張思維,鄭榮壽,朱健,張永輝.中國2003-2007年肝癌發(fā)病率與死亡率分析.中華流行病學(xué)雜志2012；33(6):547-53.)。

原發(fā)性肝癌起病隱匿，早期缺乏典型癥狀，早期診斷較困難，病程發(fā)展快，進(jìn)展迅速，確診時(shí)大多數(shù)患者已經(jīng)達(dá)到局部晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，治療困難，預(yù)后很差，嚴(yán)重地威脅人民群眾的身體健康和生命安全。手術(shù)切除和肝移植是肝癌首選的治療方法，但是大部分患者(60-70％)確診時(shí)時(shí)已經(jīng)是晚期，失去手術(shù)治療機(jī)會(huì)，只能采用其他治療方案，包括局部消融，肝動(dòng)脈介入治療(化療和栓塞)，放射治療，系統(tǒng)性治療(靶向藥物索拉非尼，以細(xì)胞毒藥物阿霉素和奧沙利鉑為主的聯(lián)合治療方案)，中醫(yī)藥治療以及免疫治療等，其中化學(xué)藥物治療起著重要作用。但是，傳統(tǒng)的化療方案(如阿霉素，鉑類藥物等)很難有效延長晚期肝癌患者的生存期。

索拉非尼(sorafenib，商品名：多吉美，Nexavar)是一種多靶點(diǎn)抑制劑，它能抑制Raf激酶的活性，阻斷下游ERK激酶的磷酸化，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增值；同時(shí)它還靶向血管內(nèi)皮生長因子受體(Vascularendothelialgrowthfactorreceptor,VEGFR)和血小板衍生生長因子受體(plateletderivedgrowthfactorreceptor,PDGFR)，從而抑制腫瘤的血管新生。索拉非尼能抑制肝癌細(xì)胞系的體外增殖，并能抑制這些細(xì)胞的體內(nèi)腫瘤生長。在兩個(gè)大型Ⅲ期臨床實(shí)驗(yàn)中(SHARP和Oriental)，索拉非尼的治療都明顯提高了患者的總生存期和疾病進(jìn)展時(shí)間。因此，2007年美國FDA和歐洲EAMA相繼批準(zhǔn)其用于治療晚期不能手術(shù)的肝細(xì)胞肝癌，2008年中國SFDA批準(zhǔn)其用于肝癌治療，是目前臨床用于晚期肝細(xì)胞肝癌患者的標(biāo)準(zhǔn)化療藥物。

然而，索拉非尼的治療效果比較短暫，只能延長患者數(shù)月的總生存期；大多數(shù)患者在接受給藥初期，表現(xiàn)良好效果；但是長期治療后，腫瘤會(huì)出現(xiàn)耐藥，并重新生長，疾病進(jìn)展，治療失敗。因此，建立對(duì)索拉非尼耐藥的肝癌模型，并探索相關(guān)耐藥機(jī)制，具有極其重大的科研價(jià)值和臨床意義。目前，對(duì)索拉非尼的耐藥機(jī)制研究處于起步階段，并且集中在體外耐藥細(xì)胞系模型上，對(duì)體內(nèi)耐藥的動(dòng)物模型尚無明確報(bào)道。有研究團(tuán)隊(duì)用索拉非尼在細(xì)胞水平長期作用于肝癌細(xì)胞系，誘導(dǎo)細(xì)胞耐藥性發(fā)生，并和親本細(xì)胞進(jìn)行比較，尋找體外耐藥機(jī)制，發(fā)現(xiàn)耐藥細(xì)胞出現(xiàn)Akt和STAT-3等信號(hào)通路的激活，以及EGFR/HER-3受體的過度活化，或者出現(xiàn)間質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)等，但是并沒有比較體外誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞在體內(nèi)對(duì)索拉非尼的反應(yīng)性。而在體內(nèi)模型中，有研究團(tuán)隊(duì)將人肝癌細(xì)胞系Hep3B接種到免疫缺陷小鼠體內(nèi)，進(jìn)行索拉非尼長期給藥，誘導(dǎo)體內(nèi)耐藥產(chǎn)生；但是他們發(fā)現(xiàn)這種耐藥性是不穩(wěn)定的而是可以產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)的。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題就是針對(duì)目前對(duì)索拉非尼耐藥的臨床前肝癌模型匱乏，難以深入研究肝癌細(xì)胞對(duì)索拉非尼的耐藥機(jī)制以及逆轉(zhuǎn)藥物開發(fā)這一技術(shù)難題，提供了對(duì)索拉非尼具有耐藥性或敏感性的人肝癌細(xì)胞系及其應(yīng)用。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之一是：一種對(duì)索拉非尼具有耐藥性的人肝癌細(xì)胞系，其保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCCNO:C2013181。

本發(fā)明所述人肝癌細(xì)胞系較佳地還包括如上所述的人肝癌細(xì)胞系的子代細(xì)胞系。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案之二是：如上所述的人肝癌細(xì)胞系在制備使免疫缺陷哺乳動(dòng)物產(chǎn)生肝癌的試劑中的用途。