[發明專利]ZmHINT基因在促進植物免疫反應中的應用

有效

• 申請號: 201410383846.8
• 申請日: 2014-08-06
• 公開（公告）號: CN104152424A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 吳劉記;陳彥惠;祖小峰;唐海濤;王順喜
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N9/14;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

技術領域

本發明涉及一種ZmHINT基因在促進植物免疫反應中的應用，屬于生物技術領域。

背景技術

組氨酸三聚體蛋白超家族是一個具有核苷酸轉移酶和水解酶活性的家族，其中，組氨酸三聚體核苷結合蛋白(Histidine?triad?nucleotide?binding?protein，HINT)是組氨酸三聚體蛋白超家族成員中分布最為廣泛的一種蛋白，該蛋白在低等植物和高等動物中均具有很高的結構和功能相似性。晶體結構研究結果表明，HINT是其他四種組氨酸三聚體蛋白超家族成員的祖先，結構和功能的保守性，預示了HINT發揮著重要的生物學功能。目前，有研究報道了關于哺乳動物HINT在細胞凋亡、腫瘤發生、發展中發揮了重要作用。相對動物HINT的研究，植物HINT的功能研究較少，尤其是對玉米HINT在植物免疫反應中的功能研究尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種ZmHINT基因在促進植物免疫反應中的應用。

本發明提供如下任一物質在提高植物免疫能力和/或增強植物抗病性中的應用：

(1)SEQ?ID?No.4所示的蛋白；

(2)SEQ?ID?No.4所示蛋白的編碼基因；

(3)含有(2)所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。

上述應用中，所述編碼基因如SEQ?ID?No.3中自5’末端起第9位至第398位核苷酸所示。

上述任一所述的應用中，所述免疫為針對禾谷鐮刀菌引起的疾病的免疫；

所述抗病為抗禾谷鐮刀菌引起的疾病。

上述任一所述的應用中，所述植物為擬南芥；

所述禾谷鐮刀菌為禾谷鐮刀菌PH-1。

一種制備免疫能力提高和/或抗病性增強的植物的方法也屬于本發明的保護范圍，包括如下步驟：將SEQ?ID?No.4所示蛋白的編碼基因導入出發植物中，得到轉基因植物；與出發植物相比，轉基因植物的免疫能力提高和/或抗病性增強。

上述方法中，所述編碼基因是通過重組表達載體導入的，所述重組表達載體是將所述編碼基因插入出發載體pCAMBIA-1304的多克隆位點得到的。

上述任一所述的方法中，所述編碼基因如SEQ?ID?No.3中自5’末端起第9位至第398位核苷酸所示；

所述重組表達載體是將SEQ?ID?No.3所示的DNA分子插入出發載體pCAMBIA-1304的NcoI和SpeI酶切位點間得到的。

上述任一所述的方法中，所述免疫為針對禾谷鐮刀菌引起的疾病的免疫；

所述抗病為抗禾谷鐮刀菌引起的疾病。

上述任一所述的方法中，所述植物為擬南芥；

所述禾谷鐮刀菌為禾谷鐮刀菌PH-1。

本發明證明ZmHINT基因在擬南芥中過表達能夠增強擬南芥的免疫能力，說明ZmHINT基因在增強植物抗病能力方面具有重要作用。

附圖說明

圖1為重組農桿菌和對照農桿菌的PCR鑒定。

圖2為不同濃度的潮霉素對轉ZmHINT基因T1代擬南芥的篩選。

圖3為轉ZmHINT基因的T2代擬南芥以及轉空載體pCAMBIA-1304的T2代擬南芥的潮霉素抗性篩選。

圖4為轉ZmHINT基因的T2代擬南芥、轉空載體pCAMBIA-1304的T2代擬南芥以及野生型擬南芥的PCR鑒定。

圖5為人工接種禾谷鐮刀菌菌株PH-1后擬南芥花序部位的表型分析。

圖6為人工接種禾谷鐮刀菌菌株PH-1后擬南芥葉片的表型分析。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

GC?Buffer購自寶生物工程(大連)有限公司，產品目錄號為9154。

B73玉米自交系(Zea?mays?ssp.mays?L.)在文獻“Patrick?S.Schnable,et?al.The?B73?Maize?Genome:Complexity,Diversity,and?Dynamics.Science?326,1112-1115(2009)”中公開過，公眾可從河南農業大學獲得。