[發明專利]一種含酸性蛋白酶的啤酒復合酶及其制備方法

在審

• 申請號: 201410379444.0
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN105316299A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發明（設計）人: 李洪兵;李海清;張錦杰;朱永明;胡永明;胡波
• 申請（專利權）人: 湖南新鴻鷹生物工程有限公司
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26;C12N9/50;C12N9/42;C12N9/16;C12N9/30;C12N9/34;C12N9/24;C12N9/44;C12N9/20;C12N9/18;C12N9/88;C12N9/58;C12N9/02;C12N9/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種含酸性蛋白酶的啤酒復合酶，由以下重量份數的原料組成：濃縮麥芽酶45-55份，淀粉酶30-40份，蛋白酶20-30份，半纖維素酶15-30份，植物提取物15-20份，濃縮麥汁粉13-18份，酯酶5-10份，保護劑5-8份，激活劑5-8份，抗氧化劑1-3份；

所述淀粉酶是由以下質量百分比組成的酶制劑均勻混合而成：30％真菌α-淀粉酶，30％糖化酶，15％β-淀粉酶，15％普魯蘭酶，10％中溫α-淀粉酶；

所述蛋白酶是由以下質量百分比組成的酶制劑均勻混合而成：中性蛋白酶50％，酸性蛋白酶40％，10％脯氨酸蛋白酶；

所述半纖維素酶是由以下質量百分比組成的酶制劑均勻混合而成：40％耐溫β-葡聚糖復合酶，30％β-葡聚糖復合酶，10％甘露聚糖酶，10％的木聚糖酶，10％的戊聚糖酶；

所述酯酶是由以下質量百分比組成的酶制劑均勻混合而成：50％酸性磷酸酶，30％脂肪酶，20％磷酸酯酶；

所述激活劑是由如下質量組份的無機鹽均勻混合而成：氯化鋅30-40份，氯化鈣10-20份，硫酸鈉10-20份，氯化鎂5-10份；

所述保護劑由以下重量份數的原料組成:靈芝多糖20-30份，海藻糖20-30份，NaCl10-20份，(NH₄)₂SO₄10-15份，半胱氨酸10-15份；

所述植物提取物的制備方法為：將大麥芽、焦香麥芽按質量比2-3:1-2均勻混合，粉碎至粒度0.5-1mm,得粉碎麥芽；然后將木瓜、菠蘿、無花果分別于盛有0.3-0.5％碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中在功率200W、頻率30KHz條件下超聲清洗5-10min，瀝干，室溫下破碎至粒度0.5-1mm，并按質量比5-7:4-6:1-3均勻混合，加入混合物質量1.5-3倍的粉碎麥芽得原料混合物，加入原料混合物1-3倍的水，用檸檬酸調節pH值為3-4，在功率150-300W、頻率2000Hz條件下進行微波提取，其中，每次微波輻照總時間60-80s,進行間隔式輻照：輻照10s，間隔10s，控制溫度20-35℃，如此輻照10次，同時在功率200-300W,頻率30-40KHz條件下進行超聲波輔助提取；保溫1-3h,然后，在功率200-400W、頻率2000Hz條件下進行微波提取，其中，每次微波輻照總時間90-105s,進行間隔式輻照：輻照15s，間隔10s，控制溫度40-60℃，如此輻照10次，同時在功率300-500W,頻率40-50KHz條件下進行超聲波輔助提取，最后自然降溫至室溫，于電場強度25-35kV/cm，脈沖時間400-600μs,脈沖頻率200-300Hz條件下進行高壓脈沖電場提取15-20min；提取液過濾得第一濾液，加濾渣2倍的水漂洗、過濾得第二濾液，將第一濾液和第二濾液按質量比1:1-2均勻混合，混合液超濾濃縮、冷凍干燥、低溫粉碎即得植物提取物。

2.如權利要求1所述的含酸性蛋白酶的啤酒復合酶，其特征在于，所述酸性蛋白酶的制備方法包括以下步驟：保存完好的宇佐美曲霉CCTCCNO：M2013601的菌種經斜面菌種活化、一級、二級、三級液體種子擴大培養至種子罐，將種子罐液體種子以5％接種量接入發酵罐培養基，培養溫度31-32℃，攪拌速度200-400r/m，通風量1:1-2,培養時間10-12h；然后以1-2℃/h降溫速率緩慢降溫至26-30℃，攪拌速度400-600r/m，通風量1:1-3,恒溫培養8-10h；繼續以1-2℃/h降溫速率緩慢降溫至23-25℃，攪拌速度500-700r/m，通風量1:2-4,培養時間22-31h，然后，將種子罐液體種子以3％接種量追加接入發酵罐，最后以1-2℃/h升溫速率緩慢升溫至31-32℃，攪拌速度200-400r/m，通風量1:1-2,恒溫培養10-12h；接著以1-2℃/h降溫速率緩慢降溫至23-25℃，攪拌速度500-700r/m，通風量1:2-4,恒溫培養22-31h；發酵液經過濾、濃縮、調配、精濾、干燥得固體酸性蛋白酶。

3.如權利要求2所述的含酸性蛋白酶的啤酒復合酶，其特征在于，所述酸性蛋白酶制備過程中發酵罐培養基組成為：麩皮60-80g,玉米粉50-60g，植物提取物40-60g，豆餅粉35-40g，中草藥提取物20-30g，海藻糖10-30g，魚粉6-10g，氯化銨10-12g，氯化鈣5-10g，干酪素3-5g，硫酸鎂2-4g，磷酸氫二鉀1-3g，硝酸鉀1-2g,硫酸鋅0.1-0.2g,純凈水l000mL，pH值5-7。