[發(fā)明專利]微衛(wèi)星不穩(wěn)定性多重檢測體系及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410377852.2
• 申請日: 2014-08-01
• 公開（公告）號: CN104087683A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙新泰;王明;李璐
• 申請（專利權(quán)）人: 上海賽安生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海海頌知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31258
• 代理人: 任益

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多重檢測體系及其檢測產(chǎn)品，尤其是一種微衛(wèi)星不穩(wěn)定性多重檢測體系以及應(yīng)用該體系的檢測產(chǎn)品，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

微衛(wèi)星不穩(wěn)定（Microsatallite?Instability，MSI）指DNA甲基化或基因突變致錯配修復(fù)基因缺失,從而導(dǎo)致微衛(wèi)星重復(fù)序列長度的改變，表現(xiàn)為同一微衛(wèi)星位點在不同個體之間以及同一個體的正常組織與某些異常組織之間，微衛(wèi)星位點的重復(fù)單位的數(shù)目不同，從而使其不能正常地發(fā)揮調(diào)控作用，導(dǎo)致細胞增殖及分化異常，促發(fā)惡性腫瘤形成。大量研究表明，MSI與結(jié)直腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等發(fā)生密切相關(guān)。

MSI的檢測具有多重臨床病理意義。大約15%的結(jié)直腸癌中存在MSI現(xiàn)象，其中典型的遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌（hereditarynon-polyposis?colorectal?cancer，HNPCC）患者90%以上為MSI瘤。與無MSI的結(jié)直腸癌相比，攜帶有MSI的結(jié)直腸癌其預(yù)后較好，并且二者藥物反應(yīng)也不一樣。

1997年美國國家腫瘤研究所（National?Cancer?Institute，NCI）舉辦會議頒布了Bethesda?指導(dǎo)綱要，確定了用來檢測MSI的參考panel（NCI?panel），推薦應(yīng)用5個微衛(wèi)星位點來進行結(jié)直腸癌的檢測,即單堿基重復(fù)序列BAT-25和BAT-26、雙堿基重復(fù)序列D2S123、D5S346和D17S250,并對MSI作出了定義。比較腫瘤和匹配的正常DNA,5個位點中有2個或2個以上位點有重復(fù)序列長度變化者為高度MSI(highfrequency?MSI,MSI-H),若只有1個位點有長度變化者為低度MSI(lowfrequency?MSI,MSI-L),無任何位點的變化稱為微衛(wèi)星穩(wěn)定(microsatellite?stable,?MSS)。2002年NCI會議對其中3個雙堿基重復(fù)位點用來評估微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)的局限性提出爭議。同期Suraweera?N等人的研究指出對于MSI-H患者，5個準(zhǔn)單態(tài)性單核苷酸重復(fù)位點的panel組（BAT-25、BAT-26、NR21、NR22及NR24）比其它微衛(wèi)星標(biāo)記更敏感。2007年Rosa?M.xicola等比較出5個準(zhǔn)單態(tài)性單核苷酸重復(fù)位點的panel組（BAT-26、BAT-25、NR21、NR22及NR24）比NCI推薦組在檢測1058例腫瘤組織微衛(wèi)星狀態(tài)時具有更高的敏感性和陽性預(yù)測值。

在2011年關(guān)于結(jié)直腸癌篩查的國際腫瘤綜合網(wǎng)（National?Comprehensive?cancer?Network,NCCN）指南中，MSI已成為首要檢測項目。①MSI檢測可用于HNPCC的篩查。超過90%的HNPCC患者腫瘤組織表現(xiàn)MSI，MSI在HNPCC中已經(jīng)成為的重要標(biāo)志物；當(dāng)高度懷疑HNPCC時，需檢測MSI。②MSI-H的結(jié)直腸癌患者預(yù)后良好的標(biāo)志物。MSI-H結(jié)腸癌患者生存期更長，較少復(fù)發(fā)，被認為是預(yù)后好的標(biāo)志之一。③MSI檢測可用于氟尿嘧啶類藥物的輔助療效預(yù)測。

現(xiàn)有技術(shù)的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性一般可通過如下2種方法檢測：

1）PCR法：選定特異的引物，以自身正常組織作對照，在體外對微衛(wèi)星位點進行PCR擴增，擴增后的產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)各種顯示系統(tǒng)（放射自顯影、銀染等）分析有無遷移率的改變。

2）基因檢測，即對相關(guān)的DNA直接進行測序。但因進行基因檢測價格昂貴，所需試驗條件較高，在臨床應(yīng)用尚未普及。