[發(fā)明專利]洛伐他汀脂蛋白的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410376203.0
• 申請(qǐng)日: 2014-08-03
• 公開（公告）號(hào): CN105311640A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史樹元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 史樹元
• 主分類號(hào): A61K47/42
• 分類號(hào): A61K47/42;A61K31/47;A61P9/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種洛伐他汀脂蛋白的合成方法。

背景技術(shù)

目前針對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化主要是通過識(shí)別動(dòng)脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊并及早臨床干預(yù)，增強(qiáng)斑塊的穩(wěn)定性，然而多數(shù)藥物治療存在的主要問題即藥物缺乏選擇特異性致使藥效降低。動(dòng)脈粥樣硬化疾病是嚴(yán)重危害人類健康的一大類疾病，致死率極高。基于此，通過構(gòu)建具有靶向能力的載藥系統(tǒng)，可以降低藥物劑量，提高藥物傳遞至病灶部位的濃度，從而有效發(fā)揮藥物療效。高密度脂蛋白是血漿中存在的內(nèi)源性脂蛋白顆粒，具有許多重要的生理功能，例如膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)、抗炎、抗氧化和抗血栓等。鑒于HDL優(yōu)良的生物特性和獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征，目前HDL已廣泛地在體外重組并應(yīng)用于抗癌抗菌藥物傳遞系統(tǒng)中，這些仿生型的高密度脂蛋白載藥系統(tǒng)在結(jié)構(gòu)或組成上與天然的HDL類似，同時(shí)在體內(nèi)表現(xiàn)出相似的生理功能。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)AS斑塊處大量聚集的巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞高度表達(dá)SR-BI受體，這為rHDL實(shí)現(xiàn)斑塊遞藥提供理論基礎(chǔ)。在前期已將體外重新構(gòu)建的仿生脂蛋白，作為包載心血管藥物的載體，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)該載體可以有效傳遞藥物至斑塊內(nèi)，然而同時(shí)發(fā)現(xiàn)這種載藥系統(tǒng)在體內(nèi)到達(dá)斑塊部位前，會(huì)被肝臟大量攝取，最終導(dǎo)致藥物傳送至靶區(qū)的量降低，從而降低了靶向效率。但是與之相應(yīng)的維生素B6衍生物的合成方法還不完善，合成較為困難且合成條件要求較高。

現(xiàn)有的洛伐他汀脂蛋白的制備方法步驟復(fù)雜，效率低且成功率無法得到保障。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明就是針對(duì)上述問題，提供一種操作簡單，效率高且成功率高的一種洛伐他汀脂蛋白的制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。

洛伐他汀脂蛋白的制備方法，包括下步驟。

（1）稱取處方量磷脂、十八胺等脂質(zhì)材料藥物，置于10mL氯仿甲醇混合溶劑的混合溶劑中溶解，50oC減壓抽真空，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)10min除去有機(jī)溶劑，室溫冷卻，液態(tài)脂質(zhì)在燒瓶壁上形成一層均勻的脂質(zhì)薄膜，放入恒溫真空干燥箱，得到干燥的脂質(zhì)薄膜。然后在已經(jīng)形成脂質(zhì)膜的燒瓶中注入15mL水合溶液進(jìn)行水合，得到的脂質(zhì)混懸液，用超聲細(xì)胞破碎儀冰浴分散，得到的初乳經(jīng)微孔濾膜過濾，即得LT-NLC混懸液。

（2）甘油三酯為中性脂質(zhì)，制備的LT-NLC的Zeta電位絕對(duì)值較低，因此考察加入正電荷脂質(zhì)十八胺對(duì)粒徑和電位的影響。固定磷脂用量為200mg，分別制備一系列不同十八胺/磷脂摩爾比1:1.5，1:3，1:5，1:7.2和無OL的LT-NLC。按“2.1”項(xiàng)下制備LT-NLC，考察不同OL/PC摩爾比對(duì)于LT-NLC粒徑、電位的影響。

（3）固定磷脂用量為200mg，調(diào)節(jié)三油酸甘油酯與磷脂的比例分別為1:5，1:10，1:13以及1:20，按“2.1”項(xiàng)下制備LT-NLC。

（4）固定磷脂用量為50mg，分別制備藥脂比為1:20、1:10、1:33、1:50的LT-NLC。按2.1項(xiàng)下制備LT-NLC，考察處方中不同藥脂比對(duì)LT-NLC粒徑、包封率的影響。作為一種優(yōu)選方案，取0.2mg維生素B6溶解于5mlDMSO中，投入6倍摩爾當(dāng)量的CDI；在30℃下，超聲水浴反應(yīng)半小時(shí)后，加入300ulDIEA及900ul腐胺。

作為一種優(yōu)選方案，制備洛伐他汀仿生高密度脂蛋白，具體工藝如下：取5mLLT-NLC與15mg的載脂蛋白在4℃磁力攪拌8小時(shí)，并透析除去膽酸鈉，透析液為pH8.0Tris即得。

本發(fā)明有益效果：本發(fā)明成功構(gòu)建了透明質(zhì)酸修飾的洛伐他汀仿生高密度脂蛋白載藥系統(tǒng)，通過單因素考察，篩選出最優(yōu)處方。同時(shí)，通過體外理化性質(zhì)表征，結(jié)果表明該載體粒徑分布均勻，Zeta電位為負(fù)，包封率和載藥量均符合要求。透射電鏡照片并證實(shí)HA包覆整個(gè)rHDL并在其表面形成致密的水化層。最后評(píng)價(jià)了該載體的體外釋放行為，結(jié)果表明HA-LT-rHDL具有良好的緩釋作用，因此可以作為有效的藥物貯庫，發(fā)揮長效治療作用。

具體實(shí)施方式

洛伐他汀脂蛋白的制備方法，包括下步驟。

（1）稱取處方量磷脂、十八胺等脂質(zhì)材料藥物，置于10mL氯仿甲醇混合溶劑的混合溶劑中溶解，50oC減壓抽真空，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)10min除去有機(jī)溶劑，室溫冷卻，液態(tài)脂質(zhì)在燒瓶壁上形成一層均勻的脂質(zhì)薄膜，放入恒溫真空干燥箱，得到干燥的脂質(zhì)薄膜。然后在已經(jīng)形成脂質(zhì)膜的燒瓶中注入15mL水合溶液進(jìn)行水合，得到的脂質(zhì)混懸液，用超聲細(xì)胞破碎儀冰浴分散，得到的初乳經(jīng)微孔濾膜過濾，即得LT-NLC混懸液。