[發明專利]一種基于全基因組結合生物信息學特異性篩選華根霉脂肪酶基因的方法

有效

• 申請號: 201410375196.2
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104195151A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 王棟;徐巖;喻曉蔚
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/70;C12N9/20;C40B40/08;C12R1/845
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種特異性篩選脂肪酶基因的方法，其特征在于，是基于華根霉全基因組序列結合生物信息學篩選潛在的脂肪酶基因候選基因，將候選基因分別在大腸桿菌中表達，通過分別檢測可溶蛋白和包涵體部分的不同催化活性進行篩選，獲得具有特定催化性能的華根霉脂肪酶基因。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，主要包括以下步驟：

(1)根據華根霉全基因組基因注釋獲得潛在的脂肪酶和酯酶基因，并對脂肪酶和酯酶進行分類，選擇已知的具有特定催化特性的脂肪酶基因，與所得華根霉基因組中潛在的脂肪酶和酯酶基因進行同源性比對，選擇同源性較高的脂肪酶或酯酶基因，預測其催化特性，作為候選基因；

(2)將候選基因建立脂肪酶基因文庫，在大腸桿菌中表達，分別檢測可溶蛋白和包涵體的不同催化特性，篩選獲得具有特定催化性能的華根霉脂肪酶基因。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述華根霉是華根霉(Rhizopus?chinensis)CCTCC?No：M201021。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述已知的具有特定催化特性的脂肪酶包括用于生物柴油合成的米根霉脂肪酶、用于非水相有機合成的南極假絲酵母脂肪酶B、用于食品加工的尖孢鐮刀菌脂肪酶。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述分別檢測可溶蛋白和包涵體的不同催化特性，是根據脂肪酶不同的催化特性和用途，采用不同的脂肪酶活性測定方法；包括橄欖油指示劑滴定法測定脂肪酶水解活性、有機相酯合成法測定脂肪酶合成活性、甲醇水解法測定脂肪酶甲醇解活性。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)以大腸桿菌BL21(DE3)為宿主，以pET-22b為表達載體。

7.應用權利要求1所述方法篩選得到的華根霉脂肪酶基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示。

8.權利要求8所述基因在制備酶制劑中的應用。