[發(fā)明專利]一種白及種子液體懸浮培養(yǎng)原球莖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410368387.6
• 申請日: 2014-07-30
• 公開（公告）號: CN104137778A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發(fā)明（設計）人: 周義峰;湯興利;劉彥紅;吳亞萍;王玫
• 申請（專利權）人: 中國科學院南京分院東臺灘涂研究院;南京農(nóng)業(yè)大學;江蘇琵琶景觀有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 裴詠萍

技術領域

????本發(fā)明涉及一種白及種子育苗技術，具體涉及一種采用液體懸浮培養(yǎng)方法對白及進行原球莖培養(yǎng)的方法。

背景技術

白及(Bletilla?striata（Thunb.）Rchb.?f.)為蘭科白及屬多年生宿根草本植物，肉質肥厚的假鱗莖供藥用；總狀花序具數(shù)朵花，花紫色或淡紅色，花型較大，直徑約5厘米，形態(tài)優(yōu)美，具有很高的藥用價值和觀賞價值。

白及在自然狀態(tài)下主要靠分株繁殖，繁殖系數(shù)較低；雖然能產(chǎn)生大量的種子，但是種子不易發(fā)芽。由于白及繁殖率低，無法適應規(guī)模化種植的需求。目前針對白及繁殖的研究主要集中于種子無菌輔助育苗和組織培養(yǎng)，該技術可以在短時間內(nèi)得到大量的實生苗，是白及生產(chǎn)上快速有效的途徑。

現(xiàn)有對白及組培均選用固體培養(yǎng)基，接種時將白及種子輕輕抖落在培養(yǎng)基的表面，但是由于白及種子呈粉末狀，非常細小，操作時難以保證每個種子都能充分接觸培養(yǎng)基或者種胚基部接觸到培養(yǎng)基，造成生長條件差異，導致出苗不整齊，且轉接操作煩瑣、工作量巨大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術中存在的缺陷，提供一種操作方便、成本低的白及種子培養(yǎng)原球莖的方法。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種白及種子液體懸浮培養(yǎng)原球莖的方法，該方法包括以下步驟：

（1）白及種子消毒；

（2）懸浮發(fā)芽培養(yǎng)：在無菌條件下，用剪刀剪開白及蒴果外殼，將種子抖落在液體發(fā)芽培養(yǎng)基中，進行震蕩培養(yǎng)；液體發(fā)芽培養(yǎng)基采用1/2MS培養(yǎng)基（即采用MS培養(yǎng)基中物質的大量元素濃度減半，其它試劑濃度同MS培養(yǎng)基）；液體發(fā)芽培養(yǎng)基中含有NAA?0.5-1.0mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1；培養(yǎng)條件為暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24-26℃，培養(yǎng)時間為30天；

（3）懸浮壯苗培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（2）懸浮發(fā)芽培養(yǎng)后得到的白及原球莖轉接于液體壯苗培養(yǎng)基中，進行震蕩培養(yǎng)；所述液體壯苗培養(yǎng)基采用1/2MS培養(yǎng)基；液體壯苗培養(yǎng)基中含有NAA?1.0mg·L^-1、6-BA?1.0mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1；培養(yǎng)條件為光照培養(yǎng)，光照時間為16h/d，光照強度為2000-2500lx，培養(yǎng)溫度為24-26℃，培養(yǎng)時間為30-45天。

其中，步驟（2）中液體發(fā)芽培養(yǎng)基中NAA的優(yōu)選濃度為0.5mg·L^-1。步驟（3）中培養(yǎng)時間優(yōu)選30天。

步驟（1）中對白及種子消毒采用以下方法：將白及蒴果表面清洗干凈，用洗衣粉洗滌5-10min，置流水沖洗干凈，再用75%酒精表面消毒5min，無菌水沖洗干凈，然后用10%次氯酸鈉溶液浸泡消毒白及蒴果，無菌水沖洗5-7遍。

并可將步驟（3）懸浮壯苗培養(yǎng)后得到的白及原球莖轉入設施育苗設備中進行煉苗或轉接于固體培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)。

本發(fā)明白及種子液體懸浮培養(yǎng)原球莖的具體步驟如下：

1.?白及種子消毒：將白及蒴果表面洗干凈，用洗衣粉洗滌5~10min，置流水沖洗干凈，再用75%酒精表面消毒5min，無菌水沖洗干凈，然后用10%次氯酸鈉溶液浸泡消毒白及蒴果，無菌水沖洗5~7遍。

2.?培養(yǎng)基配制：配制1/2MS?+0.5mg·L^-1?NAA+30g·L^-1蔗糖的白及液體發(fā)芽培養(yǎng)基和1/2MS+1.0mg·L^-1NAA+1.0mg·L^-1?6-BA+30g·L^-1蔗糖的白及液體壯苗培養(yǎng)基，于高溫條件下滅菌冷卻后待用。

3.?接種：在無菌條件下，用剪刀剪開白及蒴果外殼，將種子抖落在1/2MS?+0.5mg·L^-1?NAA?+30g·L^-1蔗糖的白及液體發(fā)芽培基中。

4.?懸浮發(fā)芽培養(yǎng)：將接種好的白及液體發(fā)芽培養(yǎng)基置于搖床中，震蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25±1℃，培養(yǎng)30天。

5.?懸浮壯苗培養(yǎng)：將懸浮培養(yǎng)發(fā)芽30天后的白及原球莖轉接于1/2MS+1.0mg·L^-1NAA?+?1.0mg·L^-1?6-BA+30g·L^-1蔗糖的白及液體壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為為培養(yǎng)溫度為（25±1）℃，光照強度2000~2500lx，光照時間16h·d^-1。震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為30-45天。