[發明專利]用于檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的酶聯免疫試劑盒

有效

• 申請號: 201410367897.1
• 申請日: 2014-07-29
• 公開（公告）號: CN105315367B
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 羅樹紅;呂志強;方建民;黃若磐
• 申請（專利權）人: 廣州瑞博奧生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

本發明公開了一種抗青霉素結合蛋白PBP2α的單克隆抗體，是由保藏號為CCTCC C2014128的雜交瘤細胞株PBP2α?4B8?G7?H7所分泌的。本發明還公開了一種用于檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的酶聯免疫試劑盒，包被抗體為本發明所述的抗PBP2α單克隆抗體；檢測抗體為HRP標記的抗PBP2α多克隆抗體。本發明所述的試劑盒能通過本發明所述的抗PBP2α單克隆抗體來檢測樣本中的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，具有簡便、快捷、實用、靈敏、高效的特點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種抗青霉素結合蛋白PBP2α的單克隆抗體，以及一種用于檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的酶聯免疫試劑盒。

背景技術

金黃色葡萄球菌是臨床上常見的毒性較強的細菌，自從上世紀40年代青霉素問世后，金黃色葡萄球菌引起的感染性疾病受到較大的控制，但隨著青霉素的廣泛使用，有些金黃色葡萄球菌產生青霉素酶，能水解β-內酰胺環，表現為對青霉素的耐藥。科學家研究出一種新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林(methicillin)。1959年應用于臨床后曾有效地控制了金黃色葡萄球菌產酶株的感染，可英國的Jevons就首次發現了耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)，MRSA從發現至今感染幾乎遍及全球，已成為院內和社區感染的重要病原菌之一。MRSA耐藥性的產生與一種青霉素結合蛋白(PBP)有關。五種PBP(1，2，3，3′和4)，它們具有合成細菌細胞壁的功能。它們與β-內酰胺類抗生素有很高的親和力，能共價結合于β-內酰胺類藥物的活動位點上，失去其活性導致細菌死亡，而MRSA產生了一種獨特的PBP，這種分子量增加了78～1000道爾頓的PBP，因其電泳率介于PBP2與PBP3之間，故稱為PBP2α。PBP2α對β-內酰胺類抗生素親和力很低，因而很少或不被β-內酰胺類藥結合。在β-內酰胺類抗生素存在的情況下，細菌仍能生長，表現出耐藥性。PBP2α的產生是受染色體甲氧西林耐藥基因(mec A)來調節的。MRSA與MSSA根本區別在于它們的PBP不同。

MRSA的不均一耐藥性，給其檢測帶來一定的困難。MRSA的檢出率受孵育溫度、時間、培養基的pH和NaCl的濃度、菌液的數量等多種因素的影響。因此，目前還沒有一種最佳的檢測方法。

MRSA感染的治療是臨床十分棘手的難題之一，關鍵是其對許多抗生素有多重耐藥。因其耐藥機制是PBPs(青霉素結合蛋白)性質的改變，因此，MRSA幾乎對所有的β-內酰胺類抗生素耐藥，且在同時，還可能對大環內酯類抗生素、氨基糖苷類抗生素等多種抗菌藥物表現出耐藥性。因此急需一種可抑制MRSA生長的非抗生素類藥物。

目前檢測MRSA的方法主要包括瓊脂篩選法和PCR技術。

瓊脂篩選法是1997年NCCLS推薦的MRSA的確證試驗，即MH培養基加NaCl(40g/L)加苯唑西林(6μg/ml)，將菌液(0.5麥氏濁度)點種或畫線35℃孵育24h，只要平皿有菌生長，即使一個菌落也是MRSA，該法敏感度為100％，常用作校正其它方法的標準，尤其適用于檢測抑菌圈直徑處于中介度的金黃色葡萄球菌。結果容易判斷，但耗時，費力。

PCR法是指根據金黃色葡萄球菌的mec A基因DNA序列設計一引物，再裂解提取被測菌的DNA作為模板，在一定條件下進行擴增，經瓊脂糖電泳后在紫外燈下觀察有無與陽性對照菌株(金黃色葡萄球菌ATCC29213)相同的區帶。PCR具有較高的靈敏度，只要被測菌有微量的基因，即出現陽性結果，因此常作為檢測MRSA的參考方法。但PCR很靈敏，有時會因實驗室的污染而出現假陽性，為使PCR具有更高的可靠性，必須對其擴增產物進行探針雜交或測序以提高特異性。而有一些耐藥基因是沉默基因，不表達mec A基因產物，有時會出現假陰性，所以分子生物學方法并非100％的敏感和特異，加上該法前期處理操作繁瑣，且需要一定的設備。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種抗青霉素結合蛋白PBP2α的單克隆抗體。