[發明專利]一種抗術后疤痕的可降解多支化糖肽水凝膠及其制備方法

有效

• 申請號: 201410365194.5
• 申請日: 2014-07-29
• 公開（公告）號: CN104311641B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 張先正;陳巍海;曾旋;馮俊
• 申請（專利權）人: 武漢拜爾默生物科技有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/107;A61K38/14;A61K9/06;A61P27/06
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙)42222
• 代理人: 汪俊鋒

技術領域

本發明涉及一種抗術后疤痕的可降解多支化糖肽水凝膠及其制備方法，屬于生物醫藥領域。

技術背景

青光眼是全球范圍內的主要致盲眼病，約占眼科疾病的14.36%。在我國，隨著計算機技術的普及與應用，以及新媒體模式的流行，人們用眼壓力隨著閱讀、工作和娛樂方式的改變不斷增大，青光眼發病率呈爆發式增長，已成為我國第二大眼病。近幾年，隨著人們對青光眼發病機制的進一步了解，激光濾過手術更受青光眼患者的青睞，目前市場占有率近70%。但濾過手術后創口極易疤痕化從而導致濾過道閉合，手術失敗，青光眼復發。為了抑制青光眼濾過手術后疤痕組織的形成（結膜下組織纖維化），臨床上常采用多次注射抗增生藥物的方法，如5-氟尿嘧啶和絲裂霉素水劑等。此類藥物會引起嚴重的毒副作用，如低眼壓性黃斑病變、濾過泡滲漏、濾過泡感染、眼內炎等，使患者痛苦不堪。此外，目前市場上可用的青光眼眼閥都依賴進口（如硅管），我國大部分青光眼患者常因無法承擔昂貴的費用退而選擇治療效果差副作用大的廉價國產藥物，但其復發率很高，患者必須長期用藥，更可怕的后果在于直接導致患者視神經受損和視力嚴重下降。因此，針對青光眼的高發生率，為了應對目前治療的困境，研究開發更高效、更安全的抑制濾過道疤痕化的制劑或青光眼濾過手術輔助器械勢在必行。

研究表明，核心蛋白多糖（Decorin）是一種小分子的硫酸軟骨素類蛋白多糖, 包含一個核心蛋白和一條氨基葡萄糖多聚糖鏈。它能降低轉化生長因子TGF-β的活性，阻斷TGF-β與其受體之間的相互作用，從而起到抑制成纖維細胞增生，防止組織纖維化的作用。但Decorin用于臨床上抑制青光眼術后瘢痕有以下缺點：蛋白多糖人工合成非常困難、價格昂貴，使用的水劑注射法需要反復注射增加病人痛苦等。從Decorin的組成結構受到啟發，科學研究證實氨基葡萄糖同樣具有抑制纖維化的作用。因此，研究設計具有良好的生物相容性、在體內可持續高效釋放氨基葡萄糖的制劑或手術輔助器械是生物醫學領域的熱點。

在過去幾十年里，由于具有良好的生物相容性、生物活性以及種類多樣性，多肽及其衍生物廣泛吸引著研究者的興趣。目前多肽產品已廣泛用于醫藥、保健品、化妝品、生物材料等眾多領域。其中，在醫藥領域已開發的多肽藥物分為治療藥物、診斷藥物和預防藥物。多肽是涉及生物體內各種細胞功能的生物活性物質，是介于氨基酸和蛋白質之間的一類化合物，由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結合而成。研究人員發現，利用分子間氫鍵作用、疏水性作用和π-π堆積作用等，多肽及其衍生物可以在水溶液自組裝形成具有納米纖維微觀結構的超分子水凝膠。由于在制備過程無需加入化學交聯劑，高含水量的多肽凝膠可以被直接注射到靶向位點，因此廣泛應用于生物醫用等領域。

在多肽分子結構中引入生命體內大量含有的疏水功能團膽固醇和氨基葡萄糖，得到與核心蛋白多糖結構類似的多支化糖肽。該糖肽在生理條件下通過自組裝形成水凝膠，該凝膠不僅生物相容性好，安全性高，而且在生理環境下可以通過降解的方式持續釋放氨基葡萄糖，起到抑制成纖維細胞生長的作用，有望用于抑制青光眼濾過手術后的疤痕化。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種生物相容性好、安全無毒的多支化糖肽水凝膠的制備方法。

制備方法如下：

（1） 利用固相合成方法制備含有膽固醇作為疏水端的三肽或四肽，三肽的氨基酸序列為天冬氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸、苯丙氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸或苯丙氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸，四肽的氨基酸序列為苯丙氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸；

（2） 通過使用不同的切落劑將合成的三肽或四肽從固相切落，得到含有一個、兩個或三個羧基的三肽或四肽；

（3） 純化的三肽或四肽與氨基葡萄糖進行縮合反應得到多支化糖肽；

（4） 通過高效液相色譜法分離純化所制得的多支化多肽；

（5） 將多支化糖肽分散在磷酸鹽緩沖溶液中，通過加熱溶解-冷卻法制備得到多支化糖肽水凝膠。

上述方案中，所用多肽全部通過固相有機合成技術制備，固相合成技術所采用的樹脂為2-氯-三苯甲基氯樹脂、Rink Amide樹脂或MBHA樹脂中的一種，肽鏈的延長為碳端到氮端。