[發(fā)明專利]一種用于測定重金屬鎘的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法無效

申請?zhí)枺?/td>	201410360880.3	申請日：	2014-07-25
公開（公告）號：	CN104090110A	公開（公告）日：	2014-10-08
發(fā)明（設計）人：	丁友超;何歡;王亞春;孫成;何重輝;蔡建和	申請（專利權）人：	江蘇省檢驗檢疫科學技術研究院;南京大學
主分類號：	G01N33/577	分類號：	G01N33/577
代理公司：	南京知識律師事務所 32207	代理人：	蔣海軍
地址：	210001***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種用于測定重金屬膠體免疫層析試紙及其制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發(fā)明屬于重金屬免疫分析領域，更具體地說，涉及一種基于單克隆抗體的測定重金屬鎘的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

重金屬污染物是對人類威脅最大的污染物之一，具有環(huán)境持久性、生物蓄積性和三致效應等特點，其在環(huán)境、食品、紡織品中的含量分布及可能存在的潛在危害一直倍受關注。目前，傳統(tǒng)的重金屬檢測方法大多采用原子吸收法、電感耦合等離子體發(fā)射光譜法、電感耦合等離子體質譜法等儀器方法。然而，這些借助儀器而進行的檢測方法雖然在精確度、靈敏度方面具有一定的優(yōu)勢，但檢測儀器昂貴、操作技術復雜、測定時間較長，使其推廣普及受到一定的限制。對于重金屬污染快速檢測技術，目前國內外研究較多的有酶抑制法、酶傳感器法和比色法等，但上述方法均有自己的缺點，難以實現(xiàn)快速篩查。因此，建立一種簡單、快捷、安全的檢測方法對重金屬的分析研究與污染控制是非常必要的。

近年來發(fā)展起來的重金屬免疫檢測法(ELISA)，克服了上述方法的缺點，利用抗原抗體的特異性反應實現(xiàn)可作為抗原或抗體的污染物的檢測，該方法檢測靈敏度高，特異性強，目前已成功應用于重金屬鎘、汞、鉛以及鋁的檢測。但是，ELISA法也有自身的缺陷，即完成一批試樣的檢測仍至少需要3h，不能達到快速檢測的要求。在免疫檢測法基礎上發(fā)展的同樣基于抗原抗體反應的膠體金免疫層析試紙條法，很好彌補了ELISA方法的缺陷，具有迅速快捷、靈敏準確、安全簡便、試劑穩(wěn)定和成本低廉等特點，可在10min內判斷出污染物的有無，亦可進行定量或半定量的測定，其敏感性與ELISA相比基本相近。

將膠體金免疫層析試紙條法應用于無機重金屬離子的檢測，基于重金屬單克隆抗體，則可實現(xiàn)快速定性篩查和半定量檢測。但金屬離子是小分子物質，既不具有免疫原性，也不具有反應原性，需要通過選擇合適的雙功能螯合劑螯合重金屬離子并與載體蛋白偶聯(lián)合成完全抗原免疫動物從而獲得金屬特異性單克隆抗體。因此，高效價、高特異性單克隆抗體的制備是制約免疫檢測技術的瓶頸。目前，本實驗室已成功制得重金屬鎘的單克隆抗體，使得膠體金免疫層析試紙條法用于重金屬鎘的測定成為可能。

發(fā)明內容

1、發(fā)明要解決的技術問題

針對現(xiàn)有技術將膠體金免疫層析試紙條法應用于無機重金屬離子的檢測中存在的難以制得重金屬鎘的單克隆抗體的問題，本發(fā)明提供一種用于測定重金屬鎘的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法，用以解決樣品中重金屬鎘的定性及半定量快速檢測，該試紙條檢測耗時短、靈敏，性能可靠，操作簡單。

2、技術方案

本發(fā)明的目的通過以下技術方案實現(xiàn)。

一種用于測定重金屬鎘的膠體金免疫層析試紙條，它包括底板，所述的底板上從左至右依次設置有樣品墊、膠體金結合墊、顯色區(qū)域和吸水區(qū)；

所述的膠體金結合墊為玻璃纖維素膜Ahlstrom8964；

所述的顯色區(qū)域包括測試線、控制線和硝酸纖維素膜載體，所述的測試線、控制線、硝酸纖維素膜載體為硝酸纖維素膜制成的Millipore135膜。

優(yōu)選地，所述的免疫層析試紙條的寬度為4mm。

優(yōu)選地，所述的底板為PVC板。

一種所述的用于測定重金屬鎘的膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其步驟為：

(A)將抗Cd-ITCBE單克隆抗體與納米膠體金顆粒結合形成帶抗體標記的納米膠體金，并噴涂在底板上形成膠體金結合墊；