[發明專利]一種蘭花無菌苗快速菌根化的方法

有效

• 申請號: 201410356170.3
• 申請日: 2014-07-24
• 公開（公告）號: CN104126508A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 黃芳;張春英;王強;謝軍峰;楊慧麗;魏翔鶯
• 申請（專利權）人: 上海市園林科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司 31128
• 代理人: 嚴新德

技術領域：

本發明涉及農業領域，尤其涉及一種蘭花的栽培技術，特別是一種蘭花無菌苗快速菌根化的方法。

背景技術：

蘭科植物，簡稱蘭花，是一類重要的觀賞和經濟價值的珍貴花卉，常采用組培方法繁殖無菌小苗，但存在著組培困難、增殖系數小，生長緩慢，移栽時存活率低等問題。蘭花菌根真菌在蘭科植物生長中起著重要的作用，促進種子的萌發，在植株生長階段促進對N、P等營養元素的吸收和利用，分泌激素促進植株的生長，甚至拮抗致病菌抑制其生長等作用。實現種苗菌根化是克服蘭苗生長緩慢、提高移栽存活率的有效方法。選擇合適的培養方法特別是培養基直接影響蘭花在菌根化效果的重要因素。普通培養基一般更有利于真菌生長，易出現真菌營養過剩造成生長過旺纏繞植株，對植株表現出致病性導致植株生長緩慢甚至死亡的現象。本發明中菌根化方法，通過與目前較為常見的共生培養方法進行比較，從而選擇效果更佳的方法。

發明內容：

本發明所要解決的技術問題是提供一種蘭花無菌苗快速菌根化的方法，所述的這種蘭花無菌苗快速菌根化的方法要解決現有技術中使用共生培養基接種法常出現的幼苗生長緩慢、菌株生長過快甚至影響幼苗生長等技術問題。

本發明一種蘭花無菌苗快速菌根化的方法，包括以下步驟：

1)一個準備栽培基質及營養液的步驟，所述的栽培基質由草炭和黃沙組成，所述的草炭和黃沙的體積比為1：1.5～3，所述的營養液是液體培養液，在所述的液體培養液中，葡萄糖的質量百分比濃度為0.15％；

2)一個對無菌苗進行接種的步驟，將組織培養生根幼苗或無菌播種小苗移栽入無菌處理的栽培基質中，在幼苗根部附近接種至少一個菌塊，所述的菌塊為保藏號為CGMCC?No:9222或者CGMCC?No:9247的菌株，所述保藏號為CGMCC?No:9222(LH53)的菌株屬于散囊菌綱(Eurotiomycetes)、散囊菌目(Onygenales)、畸枝霉屬(Malbranchea)，所述保藏號為CGMCC?No:9247(LH94)的菌株屬于傘菌綱(Agaricomycetes)，雞油菌目(Cantharellales)，膠膜菌科(Tulasnellaceae)，膠膜菌屬(Tulasnella)，分類命名為Tulasnella?sp.，所述的菌塊直徑在1～10mm之間，所述的菌塊接種處距離根系0.3～2cm，接種后幼苗放置在培養室培養，培養條件是溫度22～26℃，光照周期16～10h/8～14h，光強度為2000～4000lux，培養時間是60～100d。

進一步的，所述的液體培養液是MMN液體培養液，在所述的MMN液體培養液中，葡萄糖的質量百分比濃度為0.15％。

進一步的，所述的栽培基質中，所述的草炭和黃沙的體積比為1：2。

進一步的，所述的液體培養液中，所述的葡萄糖的質量百分比濃度為0.15％。

本發明還提供了上述的一種菌株，保藏號為CGMCC?No:9222，屬于散囊菌綱(Eurotiomycetes)、散囊菌目(Onygenales)、畸枝霉屬(Malbranchea)。

本發明還提供了上述的一種菌株，保藏號為CGMCC?No:9247，屬于傘菌綱(Agaricomycetes)，雞油菌目(Cantharellales)，膠膜菌科(Tulasnellaceae)，膠膜菌屬(Tulasnella)，分類命名為Tulasnella?sp.。

本發明還提供了上述的一種保藏號為CGMCC?No:9222的菌株在促進蘭花幼苗生長中的用途。

本發明還提供了上述的一種保藏號為CGMCC?No:9247的菌株在促進蘭花幼苗生長中的用途。

本發明的蘭花菌根真菌(LH53)，屬于散囊菌綱(Eurotiomycetes)、散囊菌目(Onygenales)、畸枝霉屬(Malbranchea),其分類命名為Malbranchea?sp.，該菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)中，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號(中科院微生物研究所)，保藏日期為2014年5月13日，保藏號為CGMCC?No：9222。