[發(fā)明專利]檢測DOCK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測DOCK8蛋白的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410336559.1
• 申請日: 2014-07-15
• 公開（公告）號: CN104101715A
• 公開（公告）日: 2014-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙曉東;秦濤
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白檢測領(lǐng)域，特別涉及檢測DOCK8蛋白的試劑盒及非診斷目的檢測DOCK8蛋白的方法。

背景技術(shù)

高IgE綜合征(HIES；或Job's綜合征)是一類以反復(fù)的皮膚和肺部感染、濕疹、血清IgE水平顯著升高和嗜酸性粒細(xì)胞增多為特征的原發(fā)性聯(lián)合免疫缺陷病。根據(jù)遺傳方式的不同，HIES分為兩類，包括常染色體顯性遺傳HIES(AD-HIES)和常染色體隱性遺傳HIES(AR-HIES)。

AD-HIES患者的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，但其臨床表現(xiàn)均有以下4個(gè)共性：①出生時(shí)或生后不久即開始出現(xiàn)頑固性濕疹樣皮炎；②血清IgE水平顯著增高；③外周血嗜酸性粒細(xì)胞增高；④反復(fù)發(fā)作的皮膚或肺膿腫。HIES的感染主要在皮膚和肺，皮膚膿腫因無通常所見的紅、腫、痛，因而又稱之為“冷膿腫”，主要致病菌為金黃色葡萄球菌，也可為肺炎球菌、流感嗜血桿菌及假單胞菌等。反復(fù)肺部感染可導(dǎo)致肺組織破壞而形成肺膨出、肺囊腫和支氣管擴(kuò)張等病癥。肺實(shí)質(zhì)的損害導(dǎo)致患者易患慢性和機(jī)會性感染，包括曲霉菌屬、綠膿桿菌、卡氏肺囊蟲以及非典型分枝桿菌感染等。曲霉菌屬與綠膿桿菌反復(fù)感染是HIES患者死亡的主要病因，故應(yīng)引起足夠重視?；純阂话銦o其他過敏表現(xiàn)，如過敏性鼻炎、蕁麻疹、哮喘。AD-HIES患者還可有免疫系統(tǒng)外的表現(xiàn)：特殊面容(前額突出、寬鼻梁、面部不對稱、眼窩深陷及雙側(cè)外眥眼距增寬)、易骨折(微小創(chuàng)傷即可引起)、脊柱側(cè)彎、關(guān)節(jié)過伸、乳牙脫落延遲及血小板增高等。目前研究認(rèn)為，AD-HIES多為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3(signal?transducers?and?activators?of?transcription,STAT3)基因突變所致。STAT3是一種轉(zhuǎn)錄因子，可被多種細(xì)胞因子和生長因子激活，包括IL-6、IL-10、IL-22、IL-23及巨噬細(xì)胞集落刺激因子。AD-HIES中STAT3突變干擾以上細(xì)胞因子激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而導(dǎo)致免疫反應(yīng)的改變。

AR-HIES患者可與AD-HIES患者有相似的表現(xiàn)，如嚴(yán)重的特應(yīng)性皮炎樣皮疹，特應(yīng)性皮炎樣皮疹通常為首發(fā)表現(xiàn)，幾乎所有HIES患者在嬰幼兒時(shí)期均可發(fā)生；反復(fù)細(xì)菌感染，如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等；血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及血清IgE增高?；颊咄ǔ０橛袊?yán)重的過敏性疾病，如哮喘以及對食物和環(huán)境過敏原過敏等。由于AR-HIES可合并聯(lián)合免疫缺陷，因此患者可反復(fù)發(fā)生頑固的病毒感染，并可能早期并發(fā)惡性腫瘤。嚴(yán)重慢性皮膚病毒感染是AR-HIES的顯著特征，累及約90％AR-HIES患者。較常見的病毒為單純皰疹病毒(herpes?simplex?virus，HSV)、人乳頭瘤病毒(human?papilloma?virus，HPV)、巨細(xì)胞病毒(molluscum?contagiosum?virus，MCV)及水痘帶狀皰疹病毒(varicella-zostervirus，VZV)。此外，約半數(shù)的患者發(fā)生皮膚黏膜念珠菌感染；少數(shù)患者因感染或血管病變發(fā)生嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，如偏癱、缺血性梗死等。此型HIES僅累及免疫系統(tǒng)，而不出現(xiàn)骨骼、牙齒及結(jié)締組織病變。多數(shù)AR-HIES患者為胞質(zhì)分裂專一物8蛋白(dedicator?of?cytokinesis8protein，DOCK8)基因突變，AR-HIES患者中DOCK8缺失可引起T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞聯(lián)合免疫缺陷，從而導(dǎo)致患者對病毒感染的抵抗力大大減弱。

DOCK8(Dedicator?of?cytokinesis8)基因定位于9p24.3，信使RNA(mRNA)有3種異構(gòu)體，包括46-48個(gè)外顯子，超過250kb的基因序列，編碼1999-2099個(gè)氨基酸約239kDa的DOCK8蛋白。DOCK8蛋白表達(dá)譜廣泛，主要表達(dá)在胎盤、腎、肺和胰腺，在免疫系統(tǒng)尤其是淋巴細(xì)胞中高度表達(dá)。DOCK8屬于DOCK180家族成員，包括兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，DHR1和DHR2(DOCK8同源域1和2)。DOCK180家族由11個(gè)非典型鳥嘌呤交換因子(guanine?exchange?factors，GEF)組成，它們可激活Rho-GTP酶包括RAC1、RAC2和CDC42。GTP酶調(diào)節(jié)很多細(xì)胞功能包括肌動蛋白細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞周期連續(xù)和基因表達(dá)。而DOCK8屬于DOCK180家族的DOCK-C亞家族成員，可激活RAC和CDC42，對細(xì)胞骨架構(gòu)成等功能至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，DOCK8蛋白微量表達(dá)或不表達(dá)可導(dǎo)致高IgE綜合征，因此，對于DOCK8蛋白的檢測具有重要的臨床意義。目前對于DOCK8基因的表達(dá)主要采用Western?blotting、Northern?blotting和免疫組化等方法進(jìn)行鑒定。