[發明專利]一種針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒

有效

• 申請號: 201410330456.4
• 申請日: 2014-07-11
• 公開（公告）號: CN104131087A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 徐志勇;秦偉
• 申請（專利權）人: 武漢千麥醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 劉榮

1.一種針對葉酸代謝基因進行基因分型的試劑盒，包括PCR反應液和DNA雜交膜條，其特征在于：所述的DNA雜交膜條由基質載體和探針組成，基質載體上依次固定有四種針對MTHFR基因的探針，以及兩種針對MTRR基因的探針和兩種針對人類基因組設計的探針，所述探針均為能夠與上述基因的SNP位點雜交的寡核苷酸序列，所述探針的核苷酸序列分別為：

針對MTHFR基因677C位點的探針T1：5’-GGGAGCCGATTTCATC-3’；

針對MTHFR基因677T位點的探針T2：5’-GGGAGTCGATTTCATC-3’；

針對MTHFR基因1298A位點的探針T3：5’-ACCAGTGAAGAAAGTGTC-3’；

針對MTHFR基因1298C位點的探針T4：5’-ACCAGTGAAGCAAGTGTC-3’；

針對MTRR基因66A位點的探針T5：5’-TCGCAGAAGAAATATGTGAG-3’；

針對MTRR基因66G位點的探針T6：5’-TCGCAGAAGAAATGTGTGA-3’；

針對人類基因組設計的陽性質控探針T7：5’-TTGAACAGGTGGAGGC-3’；

針對人類基因組設計的陰性質控探針T8：5’-TGGCCAGCGTGGACAAC-3’；

上述探針均進行5’端氨基標記以用于與基質載體偶聯，上述探針的濃度為5-20uM。

2.根據權利要求1所述的進行基因分型的試劑盒，其特征在于：所述的基質載體上還設置有顯色控制探針CC，所述顯色控制探針CC的核苷酸序列如下所示：

5’-TTCGGTTGGGCTTTAC-3’，所述顯色控制探針CC的5’端進行氨基標記，3’端進行生物素標記。

3.根據權利要求1所述的進行基因分型的試劑盒，其特征在于：所述PCR反應液中含有擴增包含MTHFR基因677位點、1298位點以及MTRR基因66位點的引物，所述引物的濃度為0.01-0.05uM，所述引物的核苷酸序列如下：

針對MTHFR基因677位點的上游引物M1：

5’-GGAGGACTGCTCACGAACTTCAGTCATGAGCCCAGCC-3’；

針對MTHFR基因677位點的下游引物M2：

5’-GGGACACGCAGTCGACATCGCAAGTGATGCCCATGTC-3’；

針對MTHFR基因1298位點的上游引物M3：

5’-GGAGGACTGCTCACGAACTTGCTTGTGGTTGACCTGG-3’；

針對MTHFR基因1298位點的下游引物M4：

5’-GGGACACGCAGTCGACATCTCCCTTTGCCATGTCCAC-3’；

針對MTRR基因66位點的上游引物M5：

5’-GGAGGACTGCTCACGAACTAGCCCAAGTAGTTTCGAGC-3’；

針對MTRR基因66位點的下游引物M6：

5’-GGGACACGCAGTCGACATCCCACTGTAACGGCTCTAACC-3’。

4.根據權利要求1所述的進行基因分型的試劑盒，其特征在于：所述PCR反應液中含有擴增包含MTHFR基因677位點、1298位點以及MTRR基因66位點的通用引物，所述通用引物的濃度為0.01-0.05uM，所述通用引物的核苷酸序列如下：

通用上游引物M7：5’-GGAGGACTGCTCACGAACT-3’；

通用下游引物M8：5’-GGGACACGCAGTCGACATC-3’；

所述通用下游引物的5’端進行生物素標記。

5.根據權利要求1所述的進行基因分型的試劑盒，其特征在于：所述的基質載體為玻片或尼龍膜。