[發(fā)明專利]高產(chǎn)原花青素刺葡萄愈傷組織的獲取與繼代保持方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410319042.1
• 申請(qǐng)日: 2014-07-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104099287A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴呈純;范麗華;黃賢貴;謝鴻根
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C12N5/04
• 分類號(hào): C12N5/04
• 代理公司: 福州市鼓樓區(qū)京華專利事務(wù)所(普通合伙) 35212
• 代理人: 宋連梅

1.一種高產(chǎn)原花青素刺葡萄愈傷組織的獲取與繼代保持方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)無(wú)菌幼胚的獲取：剪取花后20～30天的整串刺葡萄幼果，去除果穗和果柄，置入加有洗滌劑的自來(lái)水中浸泡30min，沖洗干凈，自然晾干；將幼果用75％酒精浸泡30s，接著用0.1％升汞溶液滅菌15min，再用無(wú)菌水沖洗5次，最后將滅菌好的刺葡萄幼果，小心切開(kāi)，取出完整的幼胚；

(2)啟動(dòng)培養(yǎng)：取所述幼胚，將該幼胚以平放的方式接種至誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，然后于培養(yǎng)室中黑暗條件下培養(yǎng)35天，得到初代愈傷組織；

(3)增殖培養(yǎng)：將初代愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基中，并于溫度23～25℃，光照強(qiáng)度1000～1500lx，每天光照10h的條件下進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，直至獲得生長(zhǎng)一致且生長(zhǎng)旺盛的刺葡萄愈傷組織；

(4)篩選：從步驟(3)所獲得的刺葡萄愈傷組織中，選取質(zhì)地松脆、顏色為紫紅色的刺葡萄愈傷組織，剝?nèi)プ霞t色表層，選取里層的愈傷組織接種至附加1.5mg/L2,4-二氯苯氧基乙酸的MS固體培養(yǎng)基中，于溫度23～25℃，光照強(qiáng)度1000～1500lx，每天光照10h的條件下培養(yǎng)20～25天，獲得高產(chǎn)原花青素的愈傷組織；

(5)長(zhǎng)期繼代保持：以培養(yǎng)20～25天的高產(chǎn)原花青素的愈傷組織為材料，于溫度23～25℃，光照強(qiáng)度1000～1500lx，每天光照10h的條件下，采用兩種繼代保持培養(yǎng)基交替繼代培養(yǎng)，并采用剝?nèi)ニ鲇鷤M織紫紅色表層細(xì)胞，選里層愈傷組織接種的方式，能長(zhǎng)期繼代保持高產(chǎn)原花青素的紫紅色刺葡萄愈傷組織。

2.如權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)原花青素刺葡萄愈傷組織的獲取與繼代保持方法，其特征在于：所述步驟(2)中的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+2,4-二氯苯氧基乙酸1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L，或MS培養(yǎng)基+2,4-二氯苯氧基乙酸1.0mg/L+6-糠氨基嘌呤0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。

3.如權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)原花青素刺葡萄愈傷組織的獲取與繼代保持方法，其特征在于：所述步驟(3)中的繼代增殖培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+2,4-二氯苯氧基乙酸1.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L，或MS培養(yǎng)基+2,4-二氯苯氧基乙酸1.5mg/L+6-糠氨基嘌呤0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。

4.如權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)原花青素刺葡萄愈傷組織的獲取與繼代保持方法，其特征在于：所述步驟(5)中的兩種繼代保持培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基+2,4-二氯苯氧基乙酸1.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L，以及MS培養(yǎng)基+2,4-二氯苯氧基乙酸1.5mg/L+6-糠氨基嘌呤0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉6g/L。