[發明專利]一種特異性檢測EGFR的方法

有效

• 申請號: 201410298015.0
• 申請日: 2014-06-26
• 公開（公告）號: CN104017900A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 孫侖泉;楊力芳;林奕婷
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京萬象新悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11360
• 代理人: 李稚婷

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種特異性檢測EGFR的新型分子技術，可進行EGFR基因表達水平和基因突變檢測，主要用于臨床診斷、實驗室研究、藥效監測等領域。

背景技術

腫瘤分子生物學研究的不斷深入和發展顯示，腫瘤存在高度復雜的基因變異與異質性。腫瘤的靶向治療是利用腫瘤細胞與正常細胞的分子生物學差異進行專一性藥物開發，作用于腫瘤細胞特異靶標，從而靶向殺傷腫瘤細胞。近年來在靶向治療的基礎上，個體化治療(Personalized?Medicine)通過檢測患者體內的有關藥物作用的靶位，評價藥物可能的作用，從而提高治療的有效性和安全性，在腫瘤治療中發揮越來越重要的作用(Gonzalez-Angulo?AM等,J?Clin?Oncol.,2010,28:2777-83)。

隨著對惡性腫瘤基礎研究的不斷深入，針對癌細胞異常通路和靶點的分子藥物有著廣闊的應用前景。研究發現，腫瘤細胞中表皮生長因子(epidermal?growth?factor?receptor，EGFR)高表達或突變以后異常活躍，導致細胞無限制增殖，最終發生腫瘤的局部浸潤和遠處轉移。臨床患者中已證實EGFR的過表達與腫瘤的惡性程度、浸潤轉移情況、不良預后均有密切關系，是一個重要的分子靶點。目前，針對EGFR分子靶向治療已廣泛應用于各類腫瘤的治療，相對于傳統化療藥物已顯現出其獨特的優勢。EGFR是具有酪氨酸激酶(Tyrosine?Kinase，TK)的細胞膜表面受體，由原癌基因c-erbB-l所編碼，分子量為170KD。EGFR結構包括三個區域：胞外區、跨膜區和具有TK活性的胞內區。EGFR的配體如EGF與受體結合后，可以使受體發生二聚體化并改變了受體的構象，然后激活其中的酪氨酸激酶，表現為受體自身的酪氨酸殘基發生磷酸化。磷酸化后的酪氨酸激酶募集含SH2結構域的信號轉導蛋白，然后激活下游的多個信號途徑，包括磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol3-kinases/AKT)、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated?protein?kinases，MAPK)及信號轉導和轉錄激活子(signal?transducer?and?activator?of?transcription，STAT)。上述信號的異常活化最終導致細胞諸多轉錄因子異常活躍并逐漸發生凋亡抑制、增殖失控等各種惡性腫瘤細胞特有的生物學行為(Burgess?AW等,Growth?Factors，2008，26(5)：263-274)。目前針對EGFR開展的分子靶向治療有兩大類：一類是EGFR單克隆抗體，主要作用于EGFR的細胞外區域和各種配體(如EGF，TGF-D)競爭結合，并導致EGFR失去活性，包括帕尼單抗(Panitumumab)和西妥西單抗(Cetuximab)。另一類是進入細胞內的酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine?kinase?inhibitor，TKI)，系與ATP競爭結合酪氧酸激酶并間接抑制其功能的小分子化合物。常見的EGFR-TKI包括吉非替尼(Gefinirib)、厄洛替尼(Erlotinib)、PD153035等。這些靶向藥物的療效已經在肺癌患者的個體化治療中得到肯定，如針對EGFR的酪氨酸激酶結構域的抑制劑(Gefitinib,Erlotinib)已被應用于晚期非小細胞肺癌(non-small-cell?lung?cancer,NSCL)等惡性腫瘤的臨床治療。結果顯示，EGFR基因突變、擴增與Gefitinib和Erlotinib的藥物敏感性呈正相關(Paez?JG等,Science,2004,304:1497-500)，EGFR突變陽性患者Gefitinib治療的有效率達71.2％，野生型者治療有效率卻低至1.1％。目前，臨床研究中，特別是在部分患者用傳統化療藥物無效的情況下，發現EGFR對其仍然有效。近年來，靶向EGFR的新型藥物已逐漸應用于乳腺癌、直腸癌、肝細胞癌、胰腺癌以及盆腔和泌尿道等腫瘤的治療。