[發明專利]虹鱒IFN-γ2在制備抗IHN病毒產品中的應用

有效

• 申請號: 201410293289.0
• 申請日: 2014-06-25
• 公開（公告）號: CN104043111A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 曹永生;徐黎明;趙景壯;盧彤巖
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黑龍江水產研究所
• 主分類號: A61K38/21
• 分類號: A61K38/21;A61K48/00;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種虹鱒IFN-γ2在制備抗IHN病毒產品中的應用。

背景技術

近年魚類干擾素的研究熱度逐年提高，而干擾素的抗病毒作用一直是該項研究的焦點內容。較早的，2003年通過蝕斑減少實驗，人工制備的大西洋鮭Ⅰ型干擾素α1亞類被證實具有抗傳染性胰腺壞死病毒感染的作用。隨著研究的深入，斑馬魚、虹鱒、七帶石斑魚、草魚被相繼證實具備抵抗病毒復制的能力。其中值得注意的是以制備的七帶石斑魚和草魚干擾素注射魚，能使其各自能夠抵抗病毒的感染，這為人工制備的魚類干擾素臨床應用的有效性提供了有力的證據。2005年虹鱒γ干擾素被首次克隆，并證實利用原核表達系統能夠成功制備出具有活性的重組虹鱒γ干擾素，而2009年研究表明虹鱒γ干擾素有第二個亞型的存在(rtIFN-γ2)，且其在疫苗免疫和病毒感染的初期表達水平顯著高于rtIFN-γ1。2011年研究者將虹鱒的IFN-γ和大西洋鮭的Ⅰ型干擾素α1亞類的抗病毒作用進行了比較，結果表明IFN-γ能夠上調Mx蛋白、ISG15蛋白基因的表達，并很好的抑制傳染性胰腺壞死病毒所導致的蝕斑形成，而與Ⅰ型干擾素α1亞類相比，IFN-γ能更為有效的誘導抗病毒蛋白GBP、干擾素調節轉錄因子、趨化因子IP-10的產生。因此，利用低成本、易操作、高效的原核表達系統制備具有活性的虹鱒IFN-γ2將具有很好的發展前景。

隨著我國魚類養殖行業的發展，由于養殖密度的增大和環境的變化，魚類病害的發生越發頻繁。魚類干擾素作為天然的抗病毒制劑，為防治乃至根治魚類病毒病指出了嶄新的應用前景。我國魚干擾素的人工制備已逐漸受到重視，相關發明專利有3項，其中虹鱒α干擾素制備及純化的發明專利有1項(2012年)，2013年我國學者也對虹鱒Ⅰ型干擾素(rtIFN3)進行了人工制備。傳染性造血器官壞死病(Infectious?Hematopoietic?Necrosis，IHN)常引起魚苗或幼魚高死亡率，并能隱性感染，是目前我國虹鱒養殖業的威脅因素之一，但截至目前還沒有文獻明確闡述傳染性造血器官壞死病病毒(Infectious?Hematopoietic?Necrosis?Virus，IHNV)對虹鱒干擾素的敏感性。

發明內容

本發明的一個目的是提供rtIFN-γ2蛋白或其編碼基因或含有其編碼基因的重組載體的用途。

本發明提供的rtIFN-γ2蛋白或其編碼基因或含有其編碼基因的重組載體在制備抑制傳染性造血器官壞死病病毒產品中的應用；

所述rtIFN-γ2蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

上述應用中，所述抑制病毒為抑制病毒的活性；所述rtIFN-γ2蛋白來源于虹鱒。

上述應用中，所述rtIFN-γ2編碼基因的核苷酸序列為序列表中序列1。

上述應用中，所述重組載體為將所述rtIFN-γ2編碼基因插入表達載體得到的重組載體，所述表達載體具體為pET32a，在本發明的實施例中，重組載體為將序列表中序列1所示的IFN-γ2基因插入載體pET32a的BamHI和HindIII酶切位點間得到的質粒。

上述應用中，所述產品為試劑盒或疫苗。

本發明的另一個目的是提供一種抑制傳染性造血器官壞死病病毒的重組載體。

本發明提供的重組載體，為將所述rtIFN-γ2編碼基因插入表達載體得到的重組載體。

上述重組載體中，所述表達載體為pET32a。

本發明的第三個目的是提供一種抑制傳染性造血器官壞死病病毒的重組菌。

本發明提供的重組菌，為將上述的重組載體導入宿主細胞，得到的重組菌。

上述的重組菌中，所述宿主細胞為大腸桿菌。

本發明第四個目的是提供一種傳染性造血器官壞死病疫苗。

本發明提供的傳染性造血器官壞死病疫苗，其活性成分為rtIFN-γ2蛋白或其編碼基因或含有其編碼基因的重組載體或上述重組菌。

本發明的實驗證明，本發明發現在rtIFN-γ2可在大腸桿菌中高效表達，0051μg/mL的rtIFN-γ2在CHSE-214細胞上對IHNV的抑制率為50％，并能顯著抑制IHNV在CHSE-214細胞上蝕斑的形成，最終確定其抗IHNV的活性為6.63×10⁶U/mg，本發明能夠補充目前我國無抗IHNV有效制劑的現狀，同時γ干擾素還具有免疫調節活性，可將rtIFN-γ2進一步開發為虹鱒魚用的天然免疫增強劑或佐劑。

附圖說明