[發(fā)明專利]一種酒精長期保存后河蟹基因組DNA的高效提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410292771.2 | 申請日： | 2014-06-27 |
| 公開（公告）號： | CN104031909A | 公開（公告）日： | 2014-09-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王成輝;吳廉 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海海洋大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京知本村知識產(chǎn)權(quán)代理事務所 11039 | 代理人： | 劉江良 |
| 地址： | 201306 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 酒精 長期 保存 河蟹 基因組 dna 高效 提取 方法 | ||
1.一種提取酒精長期保存后河蟹基因組的DNA方法，其特征在于包括如下步驟：
（1）剪取肌肉組織；
（2）提取基因組DNA，步驟如下；
將第（1）步剪取的河蟹肌肉置烘箱烘干酒精；將肌肉組織剪碎，再加裂解緩沖液和蛋白酶K進行消化，其中裂解緩沖液和蛋白酶K的成分和濃度為：含10mmol/L?EDTA，0.1mol/LNaCl，0.01M?Tris-Cl的STE緩沖液，10%?SDS，20mg/mL的蛋白酶K；河蟹肌肉用量與加裂解緩沖液和蛋白酶K的量之間的關(guān)系是：河蟹肌肉10-30mg，加300-500μL?STE，50-150μL?SDS和10-30μL蛋白酶K，于50-60℃的水浴鍋中消化，直至組織消化完全溶液變得清亮透明為止；
將步驟a得到的消化液離心，取上清液加飽和NaCl溶液輕混勻；
再加氯仿顛倒輕混勻；
離心，取上清液再次加入氯仿；
離心，取上清液加入異丙醇；
離心沉淀DNA；
洗滌DNA，輕搖混勻；
離心，將沉淀DNA烘干；
在烘干后的DNA加去離子水或TE溶液，并加入RNA酶去除DNA中的RNA，保存?zhèn)溆谩?/p>
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（1）步中，在剪取河蟹第二步足上的肌肉的過程中縱向剪取肌肉，烘干酒精后然后用小剪刀將組織剪碎成粉末狀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（2）步中，消化時間20至30小時，需將肌肉組織消化完全至溶液清亮透明。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（2）步中，河蟹肌肉用量與加裂解緩沖液和蛋白酶K的量之間的關(guān)系是：河蟹肌肉20mg，加400μL?STE，100μL?SDS和20μL蛋白酶K。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（2）步中，水浴的溫度為56℃。
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