[發明專利]不對稱還原前手性羰基化合物生產手性醇的方法

有效

• 申請號: 201410292443.2
• 申請日: 2014-06-25
• 公開（公告）號: CN104232696B
• 公開（公告）日: 2017-12-26
• 發明（設計）人: 楊忠華;鄧新星;靳步昆;侯亞利;黃皓;左振宇
• 申請（專利權）人: 武漢科技大學
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C12P7/62;C12P7/04;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司42104
• 代理人: 涂潔

1.一種不對稱還原前手性羰基化合物生產手性醇的方法，其特征在于，按以下步驟進行：

(1)發酵大規模培養微桿菌，在對數生長期后期離心收集濕菌體獲得活性靜息細胞菌體，冷凍保藏；所述發酵大規模培養微桿菌的方法為：

a.將斜面上生長良好的所述菌株用接種針挑取少許接種于種子培養基中，30～37℃，150～300r/min搖床培養24～48h后作為種子；

b.再以1％～5％的接種量接種到發酵培養基中大量培養細胞，培養條件為：無菌空氣0.5～1vvm^-1通氣率，150～350r/min，培養24～48h，離心并收集濕菌體，得靜息細胞；

其中，種子培養基組成比例為：葡萄糖10g，酵母提取物5g，蛋白胨5g，MgSO₄^.7H₂O 0.5g，蒸餾水1000mL，pH 7.0；

發酵培養基比例為：葡萄糖10-20g，酵母提取物1-10g，蛋白胨1-10g，異丙醇5-100mg，作為反應底物的前手性羰基化合物5-500mg，FeSO₄ 0.1g，MgSO₄^.7H₂O 0.5g，(NH₄)₂SO₄ 2g，水1000mL，pH 7.0，30～37℃；

(2)將靜息細胞菌體懸于pH緩沖液中制成菌懸液，加入底物、輔助底物與表面活性劑進行催化反應，生成單一手性的手性醇，所述底物為前手性羰基化合物，所述輔助底物為甘油，添加量為1～20g/L；所述表面活性劑為生物相容性表面活性劑，添加量占催化反應體系總體積的0.01％-0.1％；

(3)催化反應結束后利用非極性易揮發溶劑萃取反應產物，利用減壓蒸發回收萃取劑，獲得產物；

所述微桿菌為一種能夠高效不對稱還原前手性芳香酮的菌株，保藏名稱為：微桿菌(Microbacterium sp.long2)，保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為：CCTCC No:M2011449。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述菌懸液中靜息細胞菌體的細胞量為0.1-1g/mL，所用pH緩沖液為pH6.0～8.0。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述前手性羰基化合物作為底物的濃度為20～1000mmol/L。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述催化反應溫度為30～37℃，反應時間為2～24h。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中，所述前手性羰基化合物為芳香酮、羰基酯或脂肪酮或環式酮。