[發明專利]一種具有基因治療帕金森癥效果的多功能納米生物材料轉染試劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410289953.4
• 申請日: 2014-06-26
• 公開（公告）號: CN104043132A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 關燕清;劉俊明;武迪
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P25/16;A61K38/18
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

1.一種具有基因治療帕金森癥效果的多功能納米生物材料轉染試劑，其特征在于，是通過光接枝的方法將神經生長因子固定在水凝膠包裹的四氧化三鐵納米粒表面，再利用水凝膠吸附能夠干擾α-突觸核蛋白合成的質粒DNA制備得到；

所述能夠干擾α-突觸核蛋白合成的質粒DNA是指pDNA；所述pDNA是攜帶有SEQ?ID?NO.1所示序列的GV102載體。

2.一種權利要求1所述具有基因治療帕金森癥效果的多功能納米生物材料轉染試劑的制備方法，其特征在于，步驟如下：

S1.制備光活性神經生長因子；

S11.按照1：4～1：5的體積比，將二甲基甲酰胺加入到磷酸鹽緩沖液中，再加入800～900μg?N-琥珀酰亞胺酯；

S12.將60～100μg的NGF加入26～30mL步驟S11得到的含有N-琥珀酰亞胺酯和二甲基甲酰胺的磷酸鹽緩沖液中，冰浴、避光條件下攪拌反應50～72h；離心純化產物，即得到光活性神經生長因子，冷凍干燥備用；

S13.使用前，加入磷酸鹽緩沖溶液溶解并調整濃度；

S2.制備光接枝神經生長因子納米材料Fe₃O₄-OA-NIPA-AA-NGF；

S21.按照比例，稱取1～5mg水凝膠包裹的四氧化三鐵納米粒，溶于5～30mL磷酸鹽緩沖溶液中，得到磁性水凝膠溶液；

S22.將光活性神經生長因子加入磁性水凝膠溶液中，使得磁性水凝膠與光活性神經生長因子的摩爾質量比為50：1～300：1，在避光混合均勻，800～3000W超聲分散10～30min后轉移至培養皿，150～200W的紫外燈下10cm處照射8～12s，真空凍干備用；

S3.制備多功能納米生物材料轉染試劑；

按照1mg的Fe₃O₄-OA-NIPA-AA-NGF溶于4mL磷酸鹽緩沖溶液中的比例，將二者混勻，再向其中加入10～100μg?pDNA，冰浴攪拌2～3d；Fe₃O₄-OA-NIPA-AA-NGF充分吸附pDNA后，調整濃度備用。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液的pH值均為7.4；

S12所述離心是3500～5000rpm/min的轉速下，離心20～40min；

S13所述調整濃度至1ng/μL。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，S12所述離心是4000rpm/min的轉速下，離心30min。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，按照體積比，S22所述的磁性水凝膠與光活性神經生長因子的摩爾質量比為100：1。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，S22所述超聲的條件為使用超聲波清洗機，1200～2500W超聲分散10～20min；

S22所述紫外照射的條件為：150W的紫外燈下10cm處照射10s。

7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，S3所述冰浴攪拌3d。

8.權利要求2～7任一所述制備方法制備得到的多功能納米生物材料轉染試劑。

9.權利要求1或8所述多功能納米生物材料轉染試劑在制備帕金森癥治療藥物方面的應用。