[發(fā)明專(zhuān)利]一種高純度光甘草定單體的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410289036.6
• 申請(qǐng)日: 2014-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105294722B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁圣峰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖北阿泰克糖化學(xué)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07D493/04
• 分類(lèi)號(hào): C07D493/04
• 代理公司: 襄陽(yáng)嘉琛知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所42217
• 代理人: 樊靈芬

1.一種高純度光甘草定單體的制備方法，包括（1）光甘草定粗提物的提取：甘草粉碎后，用50%~95％乙醇提取3次，提取溫度為40~80℃，提取時(shí)間為1~2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮得浸膏；

（2）光甘草定的富集：采用反相C18柱色譜富集光甘草定，依次用30%醇、50%醇、70%醇和95%醇洗脫，分別收集洗脫液，HPLC檢測(cè)，光甘草定主要在70%醇的洗脫液中，收集70%醇的洗脫液，減壓濃縮至干，得到光甘草定粗品；

（3）光甘草定的純化：采用高速逆流色譜技術(shù)分離純化光甘草定，分離溶劑的選擇：根據(jù)各種溶劑的極性、粘性、比重、溶解度諸因素，設(shè)計(jì)分離溶劑，然后按分離溶劑的比例，配置20ml分離溶劑，分別吸取分離溶劑的上下相各1ml，加入光甘草定粗品樣品1mg，充分振搖，靜置分層，分別取上下層溶液，用高效液相色譜法測(cè)定上下層溶液所含光甘草定的濃度，即可求得其在該分離溶劑中的分配系數(shù)K，K =Cs/Cm ，其中Cs表示溶質(zhì)在上相的質(zhì)量濃度，Cm表示溶質(zhì)在下相的質(zhì)量濃度；選取K值在0.5－1.5范圍內(nèi)的分離溶劑作為分離制備系統(tǒng)；其中分離溶劑是由惰性溶劑、乙酸乙酯、醇和水組成，其用量體積比為2-5: 1-4:2-6:1-4，其中惰性溶劑為：石油醚、環(huán)己烷、正己烷或任意兩個(gè)的混合物，醇為甲醇、乙醇或二者的混合物；將配置的上述分離溶劑2L置于分液漏斗中充分振搖后靜置12小時(shí)，分層，取上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相；

（4）采用上海同田生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的TBE-300A型制備型逆流色譜儀，逆流色譜儀由柱塞泵、進(jìn)樣閥、紫外檢測(cè)儀、記錄儀和色譜分離柱組成，色譜分離柱是由聚四氟乙烯管多層纏繞形成的螺旋管柱，其容量為230ml，連接順序?yàn)椋褐谩⑦M(jìn)樣閥 、色譜分離柱、紫外檢測(cè)儀、記錄儀；首先使進(jìn)樣閥處于進(jìn)樣狀態(tài)，將固定相用泵以一定流速灌滿(mǎn)半制備型逆流色譜儀的色譜分離柱，開(kāi)啟速度控制器，使色譜儀的色譜分離柱正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速達(dá)800r/min時(shí)，設(shè)置流動(dòng)相流速為2.0mL/min，開(kāi)始泵流動(dòng)相,待流動(dòng)相流出色譜分離柱時(shí)，稱(chēng)取一定量光甘草定粗品放入上相、下相的混合液中溶解，用注射器注入逆流色譜儀進(jìn)樣閥的貯液管中，旋轉(zhuǎn)進(jìn)樣閥為接柱狀態(tài)，使樣品進(jìn)入色譜分離柱；根據(jù)檢測(cè)器紫外光譜圖，對(duì)分離的每個(gè)峰進(jìn)行收集，用高效液相色譜測(cè)定純度，收集光甘草定；

（5）采用HPLC分析及HSCCC峰的鑒定：利用高效液相色譜分析提取物，高效液相色譜條件： 4.6×250mm，5μm 的Agilent SB C18，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，柱溫：25℃，流速:0.8 ml/min，進(jìn)樣量: 10μl，流動(dòng)相：A：0.2%，冰乙酸水，B：乙腈，0-10min 5%-25%B；10-50min 25%-80%B；50-51min 80%-100%B，HSCCC峰的鑒定：應(yīng)用Agilent 5973N質(zhì)譜儀和Varian 600 MHz 核磁共振波譜儀分別進(jìn)行MS，¹H-NMR 和¹³C-NMR譜的測(cè)定。