[發明專利]一種耐高溫產聚羥基丁酸酯細菌

無效

• 申請號: 201410287511.6
• 申請日: 2014-06-25
• 公開（公告）號: CN104120098A
• 公開（公告）日: 2014-10-29
• 發明（設計）人: 陸祖軍;黃愛民;夏櫻花;李云飛;江紹鋒;梁士楚
• 申請（專利權）人: 廣西師范大學;桂林民華科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/085
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 羅玉榮

1.一種耐高溫產聚羥基丁酸酯細菌，CCTCC?M?2014179。

2.權利要求1所述耐高溫產聚羥基丁酸酯細菌，其特征是：篩選方法包括如下步驟：

（1）采集土壤樣品：采集地表以下5cm處的土壤為樣品；

（2）樣品預處理：取上述土壤樣品裝入已滅菌并盛裝有無菌水的容器中，密封后劇烈震搖10min，靜置懸浮液，取上清液離心2min后，取上層菌液為菌懸液，備用；

（3）擴大培養：分別取菌懸液10μL接種于250mL?LB培養液中，置于37℃恒溫箱中培養震蕩72h，得擴大菌種培養液；

（4）逐級梯升溫階篩選：取10μL擴大菌種培養液接種于250mL?LB培養液中，按溫度逐級遞升進行培養，即后一溫階所用接種菌液取自前一溫階培養的菌液；

（5）選定耐高溫菌群：在培養溫度下，觀察接種菌液后的LB培養液，如出現渾濁，則判定該菌可在此溫度下生長，反之則排除；

（6）選定耐高溫菌株：取耐50℃以上的菌液，以生理鹽水稀釋（10^-6），并均勻涂布于富氮培養基內，37℃培養48h；挑取有不同形態特征的單菌落，于37℃富氮培養基上分別擴繁后，以完全營養液體培養基加20%甘油混勻，于-80℃條件下保存；

（7）采用尼羅藍染色法，分別取耐50℃以上具不同形態特征的單菌落，接種于LB培養基培養12h；步驟（6）的耐高溫菌株經適當擴繁后稀釋（10^-6）涂布篩選培養基，于30℃條件下培養36h后，在365nm紫外燈照射下呈橘粉色菌落，即產PHB高的菌株，目標菌株再以富氮培養基37℃擴繁后，以完全營養液體培養基加20%甘油混勻，于-80℃條件下保存，得耐高溫、產PHB高的菌群。

3.根據權利要求2所述的細菌，其特征是：步驟（3）所述的培養震蕩的震蕩頻率為100r/min。

4.根據權利要求2所述的細菌，其特征是：所述富氮培養基由酵母浸粉10g/L，蛋白胨10g/L，牛肉浸粉5g/L，葡萄糖20g/L，硫酸銨5g/L加蒸餾水定容至1L制成。