[發明專利]鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201410283527.X
• 申請日: 2014-06-23
• 公開（公告）號: CN104673758A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 李澤君;石迎;閆麗萍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/86;C12N15/34;C12N15/41;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 上海序倫律師事務所 31276
• 代理人: 周東萍

1.一種鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株，其特征在于，該感染性克隆毒株是親本毒鴨坦布蘇病毒強毒株FX2010的克隆毒株，其具有SEQ?ID?NO.1所示的全基因序列，該感染性克隆毒株是通過反向遺傳操作方法制得。

2.根據權利要求1所述的鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株，其特征在于，所述反向遺傳操作方法包括以下步驟：

通過分段擴增、分段克隆、以及融合PCR，獲得含有轉錄啟動子序列的鴨坦布蘇病毒強毒株FX2010的全長cDNA；

將所述cDNA經體外轉錄獲得RNA，再將該RNA轉染細胞并從細胞上救獲鴨坦布蘇病毒強毒株FX2010的感染性克隆毒株。

3.根據權利要求2所述的鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株，其特征在于，所述轉錄啟動子為T7啟動子。

4.一種重組載體，其特征在于，包含以下鴨坦布蘇病毒強毒株FX2010全基因組序列中的部分核酸片段：SEQ?ID?NO.1序列中第3656-6353位核酸片段、第6216-9775位核酸片段、第9753-10991位核酸片段、第3656-9775位核酸片段、或第3656-10991位核酸片段。

5.一種核酸分子，其特征在于，包括SEQ?ID?NO.1所示鴨坦布蘇病毒強毒株FX2010全基因組序列的第1-1512位核酸片段、第1397-2896位核酸片段、第2643-4020位核酸片段、或SEQ?ID?NO.1序列5’端還加設有轉錄啟動子的全基因序列。

6.一種鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

分段擴增鴨坦布蘇病毒全基因組的各DNA片段；

將部分DNA片段分別克隆至載體，然后經亞克隆獲得含有覆蓋鴨坦布蘇病毒基因組第3656-10991位核酸序列的重組載體；

通過融合PCR獲得含有轉錄啟動子序列的鴨坦布蘇病毒的全長cDNA；

將所述cDNA經體外轉錄獲得RNA，再將該RNA轉染細胞并從細胞上救獲鴨坦布蘇病毒的感染性克隆毒株。

7.權利要求1所述的鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株在制備預防或治療鴨坦布蘇病毒病的疫苗中的應用。

8.權利要求1所述的鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株作為病毒載體的應用。

9.一種重組鴨坦布蘇病毒，其特征在于，該重組病毒是將權利要求1所述鴨坦布蘇病毒感染性克隆毒株的E基因替換為鴨坦布蘇病毒弱毒株的E基因而構建成的重組鴨坦布蘇病毒。