[發明專利]六倍體藏紅花種質資源的創制方法

有效

• 申請號: 201410283227.1
• 申請日: 2014-06-23
• 公開（公告）號: CN104054576A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 王貴榮;李斌連;唐克軒
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 楊元焱

技術領域

本發明涉及的是一種生物技術，具體是一種六倍體藏紅花種質資源的創制方法。

背景技術

藏紅花又名西紅花、番紅花，屬名貴緊缺中藥材，因含有藏紅花素而備受關注，被譽為世界上最貴的藥用植物、世界上最好的染料、世界上最高檔的香料。國家中醫藥管理局列為重點發展的中藥材品種。近年來藏紅花在醫療、保健、化工等方面的價值被全面開發，由于用量巨大，市場供不應求，主要依賴進口。藏紅花為三倍體，不結實，所以采用無性繁殖，“種球”在繁殖過程中很容易感染植物病毒，一經染毒很難去除而且會越來越嚴重，極大降低了藏紅花的產量和質量。經對現有技術的檢索發現，藏紅花脫毒后增產效果明顯。可是，像其它單子葉植物一樣，藏紅花沒有普通意義上的莖，葉片與球莖直接相連，生長點位于葉與球莖的交叉處。由于葉與球莖的交叉的面積比較大，所以在顯微鏡下尋找并剝離生長點如“大海撈針”般困難；另外無菌苗誘導出來的微型球根生長緩慢，不能快速繁殖。所以藏紅花脫毒研究至今尚未取得實質性進展。

發明內容

本發明的目的，就是為了解決上述問題，提供一種六倍體藏紅花種質資源的創制方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：一種六倍體藏紅花種質資源的創制方法，包括如下步驟：

步驟一，將藏紅花球根表面消毒后接種到MS空培養基中，得到無菌苗；

步驟二，無菌苗生長40-60天后，取其下部球根上的頂芽和側芽進行超聲處理；

步驟三，將超聲處理后的材料在0.5-1.0％的秋水仙溶液素中浸泡10-20分鐘；

步驟四，將秋水仙素溶液浸泡過的材料進行離心操作；

步驟五，將離心后的材料轉入出芽誘導培養基中培養30-40天；

步驟六，從步驟五中所得叢生芽上切取生長點進行壓片鏡檢；

步驟七，將鏡檢初步篩選為六倍體的幼芽用流式細胞儀進一步檢測篩選，最終得到純合的藏紅花六倍體植物材料。

本發明所得六倍體藏紅花材料可以用來誘導藏紅花的開花結實，從而得到無病毒種源，生產上有巨大的應用價值。

具體實施方式

下面對本發明的實施例作詳細說明，該實施例以本發明中的技術方案為前提，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。

本實施例的藏紅花球形根來自上海交通大學。

實施例的步驟如下：

1.將藏紅花球根表面消毒后接種到MS空培養基中，得到無菌苗；

2.無菌苗生長60天后，取其下部球根上的頂芽和側芽，超聲(80w)處理10分鐘；

3.超聲處理后的材料在0.5-1.0％的秋水仙溶液素中浸泡20分鐘；

4.秋水仙素溶液浸泡過的材料5000轉/分鐘的條件下離心5分鐘；

5.將離心后的植物材料轉入出芽誘導培養基基中，配方為：MS+6-BA0.2-1.0mg·L^-1+TDZ0.1-1.0mg·L^-1；

6.培養40天后出現了叢生芽，將新生芽生長點進行壓片鏡檢后發現六倍體的材料；

7.將鏡檢初步篩選為六倍體的幼芽用流式細胞儀進一步檢測，最終得到純合的藏紅花六倍體植物材料。

本實施例中，共獲得了4棵六倍體藏紅花植株，正在進行開花結實試驗。